I. Genetické minimum - chromozómové choroby a ich diagnostika
Ďurovčíková Darina
Klinika lekárskej genetiky SZU a FNsP, Bratislava
Úvod
Genetické choroby vznikajú v dôsledku mutácii na úrovni génu, alebo väčšej časti genómu, v interakcii s exogénnymi faktormi. Výskyt geneticky podmienených patologických stavov ( tab.1), alebo predispozícia k nim sa podľa viacerých štatistík odhaduje na 12-15% (1,2).
Etiologickú rôznorodosť spôsobujú rôzne typy genetických defektov, detekcia ktorých si vyžaduje špecifické laboratórne metódy (tab.1). V ostatnom čase sme zaznamenali ich významný pokrok, týkajúci sa najmä rozvoja genetických diagnostických testov, ktoré majú priamy dopad na manažment komplexnej starostlivosti o pacientov a rizikových členov rodiny. Pre včasnú diagnostiku a prevenciu genetických ochorení je dôležité vzdelávanie a transfer poznatkov do praxe každého lekára. Potrebe začlenenia najnovších poznatkov z medicínskeho výskumu a genetiky do pregraduálneho a postgraduálneho vzdelávania sú venované osobitné príspevky na blížiacej sa konferencii AMEE (Association of Medical Education in Europe). Forsíruje sa dostupnosť vedomostí s cieľom rozpoznať genotypo-fenotypové korelácie najmä vo vzťahu k liečbe a celkovej zdravotnej starostlivosti (3). Iné asociácie a spoločnosti (ESHG, OECD) odporúčajú vzdelávanie v uvedených oblastiach vrátane genomiky a proteomiky zaradiť aj do mimoprofesného vzdelávania pracovníkov v zdravotníctve ako aj pre širokú laickú verejnosť. Primeraná úroveň vzdelania zbavuje neopodstatnených obáv z genetiky, ktorá je v 21.storočí neoddeliteľnou súčasťou liečebno-preventívnej starostlivosti.
S potešením možno konštatovať, že uvedené odporúčania u nás viac rokov akceptujeme. Otázky genetického testovania, algoritmy genetickej diagnostiky, správnej laboratórnej praxe, etiky a legislatívy v odbore sú náplňou pravidelných školiacich aktivít na SZU.
Zároveň sú pre nás ambíciou zaplniť priestor v tomto periodiku na pokračovanie, ktorého obsahom bude minimum genetických poznatkov. Prvú časť venujeme chromozómovým ochoreniam a prehľadu ich diagnostických metód.
I. Chromozómové choroby
Chromozómové anomálie pozorujeme ako zmeny na chromozómoch , ktoré môžu byť :
- vrodené (konštitučné)
- získané (v priebehu života napr. malígnym procesom v bunke).
Vrodené chromozómové anomálie spôsobujú zmenou počtu, alebo štruktúry chromozómov génovú nerovnováhu a upozornia na seba závažnou poruchou morfogenézy. Pre autozómové anomálie je typický výskyt VVCH spolu s mentálnou retardáciou (obr.1). Anomálie pohlavných chromozómov sprevádzajú poruchy rastu a somatosexuálneho vývinu a sú z klinického hľadiska menej závažné. Vyhľadávanie ich zvýšeného rizika sa uskutočňuje celoplošným prenatálnym biochemický skríningom ( sAFP a betaHCG ) u tehotných žien v rozmedzí 16-18 týždňa gravidity. Vrodené a získané chromozómové anomálie potvrdíme cytogenetickým vyšetrením pri ktorom sa stanoví karyotyp. Výskyt chromozómových chýb v populácii živorodených je cca 1% (2.4).
Diagnostické známky na klinickej úrovni
Na chromozómové ochorenia u novorodenca upozorňuje prítomnosť vrodených vývinových chýb (VVCH) , ktoré sú zastúpené v ich etiológii cca 5%. Signálmi pre chromozómovú anomáliu bývajú nevysvetliteľná polystigmatizácia, tonusové poruchy, rôzne patologické parametre zistené prenatálnym ultrazvukovým vyšetrením plodu ako sú: mikrocefalia, zhrubnutá nuchálna riasa, rastová retardácia a rôzne orgánové anomálie a iné. Neskôr to býva mentálna retardácia, zaostávanie rastu, pubertálneho vývinu, nástupu menštruácie a iné. V dospelosti sa konštitučná chromozómová anomália diagnostikuje skôr výnimočne. Ich záchyt pozorujeme pri vyšetrení párov pre poruchy fertility a reprodukcie v podobe anomálií pohlavných chromozómov, zriedkavých foriem malých gonozómových mozaík a vyvážených chromozómových prestávb.
Charakteristika a rozdelenie
Predstavujú odchylky od normálnej chromozómovej výbavy somatickej bunky, ktorá obsahuje 22 párov autozómov (1-22 ) a pár pohlavných chromozómov – gonozómov (XX, alebo XY). Najčastejšou príčinou vzniku aneuploidie je nondisjukcia, alebo patologické rozdelenie chromozómov v meióze, ktoré vzniká prezygoticky. Zriedkavo sú dôsledkom postzygotickej poruchy mitotického bunkového delenia. Tieto javy sú väčšinou náhodné, aj keď sa pripúšťa, že určité rodiny môžu mať sklon k nondisjuncii (asynchrónne delenie pri predčasnom delení centroméry). Len istá malá časť chromozómových anomáli vzniká zákonite v dôsledku vyvážených anomálií (prestavieb chromozómov), ktoré sa vyskytujú v populácii ich zdravých prenášačov s frekvenciou menej ako 0,2% (4)
Rozdelenie podľa (I a II) zohľadňuje typy chromozómov a konkrétne zmeny.
I. Rozdelenie podľa typu chromozómov
A./ AUTOZÓMOVÉ
B./ GONOZÓMOVÉ
II. Podľa typu zmien v počte a štruktúre chromozómov:
a/ numerické - odchýlky od normálneho počtu diploidnej sady chromozómov somatickej bunky. Môže ísť nadpočetný chromozóm z páru ( trizómia ), chýbajúci ( monozómia ), dva nadpočetné chromozómy z páru ( tetrazómia ) , násobky sady chromozómov ( triploidie ) a iné odchylky od normálneho počtu (aneuploidie ). Z autozómových anomálií k nim patrí trizómia 21 - Downov syndróm. Ide o najčastejšiu chromozómovú anomáliu, ktorej výskyt populácii je od od 1:750-1000 živorodených. Medzi ďaľšie zvyčajne neonatálne letálne trizómie patria Patauov ( trizómia 13 ) a Edwardsov ( trizómia 18 ) syndróm.
Trizómia môže byť voľná, náhodná forma s nízkym rizikom rekurencie, alebo translokačná. Táto mohla vzniknúť ako mutácia de novo, alebo dôsledkom vyváženej translokácie jedného z rodičov. Z gonozómových anomálií má najčastejší výskyt monozómia X, alebo Turnerov ( karyotyp 45,X0 ) a Klinefelterov syndróm ( karyotyp 47,XXY), ktoré sa zisťujú v čistej, alebo mozaikovej forme. Výskyt vybraných chromozómových anomálií je v tabuľke č.2.
b/ štruktúrové - charakterizuje zmena štruktúry chromozómu vizualizovateľné ako prestavby krátkeho (p) a / alebo dlhého ramienka (q) chromozómu. Patria sem chýbanie určitého úseku chromozómu (delécia), alebo zmnoženie (duplikácia) istého úseku chromozómu. Ďalej sú to premiestnenie časti chromozómu na iný (translokácia), alebo iné tvarové zmeny chromozómov ( prstencový chromozóm, izochromozóm). Príkladom autozómovej štruktúrovej anomálie je syndróm mačacieho plaču (Cri-de-Chat sy ), ktorý spôsobuje delécia úseku krátkeho ramienka chromozómu č.5 (obr.2) Zjednodušený zápis karyotypu u chlapca s týmto syndrómom je 46,XY, 5p-. Z gonozómových anomálií sa pomerne často vyskytuje prstencový chromozóm X - karyotyp 45,X r(X), alebo izochromozóm, ktorý sa u ženy manifestuje ako Turnerov syndróm (5). Submikroskopické zmeny, kryptické translokácie nie sú možné touto metódou obsiahnúť.
c/ mozaiky: predstavujú prítomnosť viacerých bunkových klonov s rozdielnou chromozómovou výbavou. Pozorujeme ich v bunkách ako rôzne chromozómové línie, nezriedka ako minoritné, s frekvenciou menšou ako 10%. Na ich detekciu je potrebné zhodnotiť väčšie množstvo mitotických figúr. Časté sú napríklad mozaikové formy Turnerovho syndrómu, Klinefelterovho syndrómu. U týchto pacientov teda nájdeme v bunkách karyotyp s normálnym a patologickým chromozómovým nálezom. Zápis karyotypu obsahuje viacero línii a začína sa zvyčajne najpočetnejšie zastúpenou. Mozaika Turnerovho syndrómu môže mať aj takýto nezvyčajný karyotyp ( 45,XO/46,XX/46,XY ). V tomto prípade prevažuje línia s chýbajúcim X chromozóm, prítomná je aj normálna a minoritná s prítomnosťou Y chromozómu. Existujú aj iné varianty s prstencovým, alebo s izochromozómom.
Genetické diagnostické testy
Chromozómové anomálie najčastejšie diagnostikujeme laboratórnymi technikami, ktoré poskytujú kompletnú analýzu karyotypu. V ostatnom čase sa klasické metódy identifikácie chromozómov dopĺňajú o nové zobrazovacie metódy, ktorými sa odhaľujú predtým nepoznané prestavby na submikroskopickej úrovni (5,6).
Klasická metóda cytogenetického vyšetrenia je založená na analýze metafázových chromozómov získaných mitotickým delením kultivovaných lymfocytoch, ktoré sa farbia konvenčne a prúžkovacími metódami (C, G, R, Q). Detekuje numerické a štruktúrové anomálie na úrovni do 550 bandov. Vyššiu rozlišovaciu schopnosť dosiahneme metódou HRT (High resolution method), kde sa hodnotia dlhšie prometafázické chromozómy. Vyšetrenie karyotypu touto metódou vyžaduje odbornú skúsenosť a pre jej náročnosť ju nahrádzajú iné modernejšie metódy farebnej cytogenetiky (6).
Klasická cytogenetika sa rutinne využíva v diagnostike konštitučných chromozómových anomálií u pacientov s vrodenými vývinovými chybami (VVCH), mentálnou retardáciou ( MR ), poruchami rastu a pohlavného vývinu, alebo pri opakovaných spontánnych potratov. V neposlednej rade aj v prenatálnej diagnostike u plodu, ktorá sa uskutočňuje po stanovení ich rizika klinickým genetikom. Gonozómové anomálie, najmä v nizkopercentnej mozaikovej forme (Turnerov, Klinefelterov syndróm) sa môžu výnimočne diagnostikovať až pri poruchách reprodukcie v dospelom veku. Klasická metóda umožní záchyt štruktúrových anomálií a mnohonásobných chromozómových prestávb, ktoré sú typické pre syndrómy chromozómovej instability s rizikom malignity. Príkladom sú Fanconiho anémia, Ataxia teleangiektázia, Nijmegenský syndróm a iné. Manifestujú sa zvýšenou lomivosťou chromozómov. Najčastejšie sa pri týchto syndrómov zistí instabilná chromozómová translokácia 7/14, spolu s inými štruktúrovými zmenami a figúrami ( gapy, breaky, triradiály, kvadruradiály), ktoré bývajú v rôznom percentuálnom zastúpení (obr.3).
Fluorescenčná in situ hybridizácia ( FISH ) metóda používa metódy molekulovej cytogenetiky. Umožní diagnostiku chromozómových prestávb na submikroskopickej úrovni ( < 800 bandov ), ktoré nie sú vizualizovateľné klasickou technikou . Ide najmä o mikrodelečné a mikroduplikačné syndrómy a pomáha tiež odhaliť nízkopercentné mozaiky. Princípom je detekcia signálov po hybridizácii pacientovej chromozómovej DNA so špecifickými sondami (centromerickými, celochromozómovým, alebo lokusovo špecifickými) použitými podľa potreby (obr.4 ). Centromerické sondy sa používajú na zisťovanie numerických chromozómových chýb s dôkazom prítomnosti centromér, telomerických sekvencií a obsahu heterochromatínu. Celochromozómové sondy hybridizujú so svojim homológom pozdĺž celého chromozómu. Sú vhodné na diagnostiku štruktúrových anomálií chromozómov ako sú translokácie, delécie, inverzie. Lokusovo špecifické, alebo génové sondy hybridizujú do oblasti hľadaných konkrétnych sekvencii. Tento typ sond, veľkosti cca 150 kb, sa využíva k diagnostike mikrodelečných syndrómov ako sú napríklad najznámejšie z nich ( Praderov-Williho, Angelmanov, Di-Georgov, Wiliamsov-Beuerenov). Výhodou tejto metódy je hodnotenie signálov na väčšom počte chromozómov aj bunkových jadier. Použitie FISH a iných DNA metód detekujúcich sekvencie v oblasti SRY chromozómu Y umožňuje pri mozaikových formách Turnerovho syndrómu vyhľadávať pacientky s rizikom gonadoblastómu.
Kombinácia klasických a molekulovo cytogenetických metód sa využíva v onkogenetike pri diagnostike a liečbe hemoblastóz, vrátane monitorovania reziduálnej choroby a postransplantačných stavoch. Chronickú myeloickú leukémiu potvrdzuje výskyt chromozómu Philadelphia, ktorý vzniká v dôsledku translokácie medzi dlhými ramenami
Iné modifikované techniky
CGH - Komparatívna genómová hybridizácia je založená na porovnávaní dvoch fluorescenčne značených vzoriek DNA ( referenčnej a pacientovej), ktoré hybridizujú s normálnymi metafázovými chromozómami. Pacientová testovaná DNA je značená zeleným flurochrómom a referenčná vzorka ( DNA od zdravého jedinca s normálnym karyotypom ) sa označuje červeným. V pomere 1:1 sa obidve nechajú hybridizovať na preparáte s normálnymi chromozómami. Nerovnováhu v testovanej vzorke zistíme vyhodnotením pomeru intenzity zelenej a červenej fluorescencie pomocou špeciálneho softwaru. Využíva sa v nádorovej cytogenetike na skrínovanie chromozómovej nerovnováhy. Metóda však presnejšiu identifikáciu prestavby neumožňuje.
Multicolor FISH- mnohonásobná farebná fluorescentná in situ hybridizácia K detekcii zmien sa používa zmes rozdielne značených sond 5 fluorochrómami a ich vzájomnou kombináciou, čím sa docieli rozlíšenie všetkých chromozómov. Na vyhodnotenie je potrebná digitálna zobrazovacia mikroskopia s filtrami, CCD kamera a počítačový software k analýze obrazu. Na základe fluorochrómovej kompozície sa každému chromozómu určí tzv.pseudofarba..Táto metóda sa používa na identifikáciu zložitejších translokácií a prestavieb medzi viacerými chromozómami. Neumožňuje detekciu vnútrochromozómových zmien typu inverzií a malých delécií.
SKY - spektrálne karyotypovanie je variantom mnohofarebnej FISH, každému chromozómu je tiež pridelená pseudofarba. Kombinuje snímanie obrazu trojakým filtrom CCD kamerou s Fourierovou spektroskopiou a príslušným počítačovým programom.
mBAND - metóda mnohonásobného pruhovania - je založená na podobnom princípe ako FISH. Podstatou m.-pruhovania je označenie jedného chromozómu viacerými značenými sondami. V kombinácii sa tiež používa 5 fluorochrómov. Každá sonda hybridizuje s inou časťou chromozómu. Na základe hybridizačných signálov dochádza k tvorbe priečnych farebných pruhov po celej dĺžke chromozómu.
Záver: Zlatým štandardom klinickej cytogenetiky je vyšetrenie karyotypu klasickou metódou. S pribúdajúcimi dôkazmi o výskyte submikroskopických chromozómových zmien, kryptických prestávb modernými laboratórnymi technikami sa zvyšuje pravdepodobnosť odhaliť kauzálnu súvislosť s etiologicky neobjasnenou mentálnou retardáciou a polystigmatizáciou.
Literatúra:
1. Smith, C. J., Donnai , D.: Human malformation. In: Emery and Rimon´s Principles and Practice of Medical Genetics. 3.vyd. New-York: Churchill Livingstone, 1998, s. 687 - 696.
2. Thompson and Thompsonová : Genetics in medicine, W.B.Saunders company, 6-th Ed., 2001, s.443.
3. Internetové adresy: www.amee.org
4. VOGEL, F., MOTULSKY, A.G. Human Genetics. 3. vyd .Berlin-Heidelberg: Springer - Verlag , 1997, s 370 -376 .
5. Izakovič V. a kolektív: Cytogenetika v klinickej endokrinológii., Osveta Martin, 1972, 320 s.
6. Černáková I., Ďurovčíková D., Brozmanová, M.: De novo tandem duplication 15q21-26 identified by FISH. Cytogenet.Cell. Genet.,Vol.85,1999, Suppl.1., s.144
Tab.1 Geneticky podmienené patologické stavy
Chromozómové ( 0,6 – 0,9 %)
Monogénové ( 0,8% )
AD, AR, X-viazané
Multifaktoriálne ( polygénne dedičné)
a/ izolované VVCH ( 3-5% )
b/ choroby dospelého veku ( 5% )
Genetické poruchy somatických buniek
Mitochondriálne dedičné
____________________________________________
Celkový výskyt v populácii živorodených : 12 -15%
Tab. 2 Populačná frekvencia chromozómových syndrómov
( na 1000 živorodených )
Trizómia 21 (Downov ) |
1,5 |
Trizómia 18 (Edwardsov ) |
0,12 |
Trizómia 13 (Patauov) |
0,07 |
47,XXY (Klinefelterov) |
1,5 |
45,X (Turnerov ) |
0,4 |
XYY sy |
1,5 |
XXX sy |
0,65 |
Komentáře
Přehled komentářů
Hello! Iam Natalie, very nice and sexy bi girl from France!
I like chat and play with mens and womens)
Dive into the world of entertainment with top dating video chats. This is a real explosion of emotions!
Feel the excitement of new experiences with video roulettes of models for all tastes and themes. Start here >>>>
Your personal portal to the world of online entertainment! Webcam models are waiting for you, offering a variety of fantasies and emotions.
https://lv.girls-888.com
https://il.livesex18.ru
Wait there personally YOU!!!
Open the doors to exciting adventures with the best cam models! Enjoy a variety of online entertainment.
(NatalieUnmat, 20. 2. 2024 1:49)
Hello! Iam Natalie, very nice and sexy bi girl from France!
I like chat and play with mens and womens)
Exclusive video chats for true connoisseurs of diversity! Experience unique experiences every day.
Give yourself unforgettable moments in the company of webcam models. Enjoy high-quality video at any time of the day!
Don't miss the opportunity to plunge into the world of new experiences! Video roulettes with models on any topic are waiting for you right now.
https://rt.strip-888.com
https://ee.flirtdream.ru
Wait there personally YOU!!!
Men Dating Men: Celebrating Adulation and Pull
(Albertanodo, 20. 2. 2024 1:24)
Men dating men participation get a bang, consistency, and the belle of relationships in their own unique way.
https://gay0day.com/
In a life that embraces distinctiveness and inclusivity, same-sex relationships from ground their place. Men who fixture men direct the joys and challenges of edifice relevant connections based on authenticity and mutual understanding. They consecrate love while overcoming societal expectations, stereotypes, and discrimination.
https://bdsmporn.one/videos/761/sarah-simon-can-t-live-without-to-cheating-her-spouse-with-the-car-mechanic-lad-who-likes-to-dominate-his-obedient-floozy-and-copulates-her-gazoo-aperture-hard-until-this-babe-has-orgasms-and-that-babe-enjoys-that-part-two/
Communication and fervent intimacy play a crucial task in their relationships, fostering trust and deepening their bond. As system progresses close to conformity, it is significant to approve and regard the care shared between men dating men, embracing their incomparable experiences and contributions to the tapestry of human connections.
Отзыв о привороте- привороты екатеринбурге
(LarryMat, 19. 2. 2024 23:46)
Отзывы о приворотах в Екатеринбурге
-----------------------------------------
Но случайно наткнулась на сайт Романа Петровича, и что удивительно, он тоже с Дальнего Востока, как и мы с мужем, откуда много шаманов. Решила попробовать в последний раз и не прогадала!Я очень благодарна Роману Петровичу за помощь. Он настоящий профессионал своего дела и знает, как вернуть счастье в семью. Я рекомендую его всем, кто столкнулся с проблемами в отношениях. Спасибо, Роман Петрович, за ваше волшебство и поддержку!Каждый день наши отношения становились все лучше. Муж стал внимательнее и заботливее, а я почувствовала, что его чувства ко мне вернулись. Благодаря кладбищенскому привороту, наша семья стала крепче и счастливее.С Романом Петровичем мы поговорили о моих проблемах, и он предложил мне кладбищенский приворот для возврата чувств моего мужа. Решила довериться его опыту и приступила к ритуалу с надеждой на лучшее.Хочу поделиться своим отзывом о работе с магом Романом Петровичем с сайта https://cmag666.ru. Я из провинции, живу в небольшой деревне в окрестностях Екатеринбурга, и когда у меня возникли проблемы с мужем, я честно говоря, не знала к кому обратиться. Местные "маги" из Екатеринбурга ничем не помогли, и я уже было решила, что все потеряно. А в нашей деревне таких людей нет, все нынче в другое погружены, не до человеческих проблем им!
- кто делает приворот в екатеринбурге
- приворот по фото екатеринбург
- сделать приворот в екатеринбурге
- снять приворот в екатеринбурге
- приворот в екатеринбурге отзывы
Отзыв о привороте - приворот кладбищенские отзывы
(ScottpeR, 19. 2. 2024 22:34)
Добрый день! Я обратилась к магу Роману Петровичу с просьбой о помощи в восстановлении отношений с моим мужем. Роман Петрович рекомендовал мне кладбищенский приворот по фотографии, чтобы вернуть искру в наши отношения. Результаты были поразительны: мои чувства стали более глубокими, а отношения стали стабильными и гармоничными. Я очень благодарна Роману Петровичу за его помощь и эффективные ритуалы!
-отзывы на кладбищенские привороты
-отзывы тех на кого делали кладбищенский приворот
-отзывы кто делал кладбищенские привороты
-кто делал кладбищенские привороты отзывы
-кладбищенские привороты отзывы форум
Мой сайт стоял на месте, но данный продукт смог его раскачать
(Michaelmub, 19. 2. 2024 8:22)
Привет всем!
Seo специалистам на заметку, прогон Bullet это что-то новенькое!
Мой сайт стоял на месте, но данный продукт смог его раскачать
https://www.google.com/search?q=%D0%BF%D1%80%D0%BE%D0%B3%D0%BE%D0%BD+%D1%81%D0%B0%D0%B9%D1%82%D0%B0+bullet&sca_esv=46579d9512b829aa&ei=PAjSZb-wLdSP1fIPxeKh6AM&udm=&ved=0ahUKEwi_vsOxgbWEAxXUR1UIHUVxCD0Q4dUDCBA&uact=5&oq=%D0%BF%D1%80%D0%BE%D0%B3%D0%BE%D0%BD+%D1%81%D0%B0%D0%B9%D1%82%D0%B0+bullet&gs_lp=Egxnd3Mtd2l6LXNlcnAiHtC_0YDQvtCz0L7QvSDRgdCw0LnRgtCwIGJ1bGxldEj_GlC0BljhGHAGeAGQAQKYAYYCoAG9EaoBBTAuMi44uAEDyAEA-AEBwgIKEAAYRxjWBBiwA8ICCBAhGKABGMMEwgIMECEYChigARjDBBgqwgIKECEYChigARjDBIgGAZAGCA&sclient=gws-wiz-serp
https://www.google.com/search?q=%D0%BF%D1%80%D0%BE%D0%B4%D0%B2%D0%B8%D0%B6%D0%B5%D0%BD%D0%B8%D0%B5+%D1%81%D0%B0%D0%B9%D1%82%D0%B0+%D0%B2+google+%D1%82%D0%B0%D1%80%D0%B8%D1%84+bullet+kwork&sca_esv=46579d9512b829aa&ei=LxzSZZCSGrygwPAP8fGNmAQ&udm=&ved=0ahUKEwjQ5cq0lLWEAxU8EBAIHfF4A0MQ4dUDCBA&uact=5&oq=%D0%BF%D1%80%D0%BE%D0%B4%D0%B2%D0%B8%D0%B6%D0%B5%D0%BD%D0%B8%D0%B5+%D1%81%D0%B0%D0%B9%D1%82%D0%B0+%D0%B2+google+%D1%82%D0%B0%D1%80%D0%B8%D1%84+bullet+kwork&gs_lp=Egxnd3Mtd2l6LXNlcnAiQ9C_0YDQvtC00LLQuNC20LXQvdC40LUg0YHQsNC50YLQsCDQsiBnb29nbGUg0YLQsNGA0LjRhCBidWxsZXQga3dvcmsyCBAhGKABGMMESPVMUOYcWJ5FcAZ4AZABA5gB8AGgAY8UqgEGMC4xMC40uAEDyAEA-AEBwgIKEAAYRxjWBBiwA8ICCBAAGIkFGKIEwgIMECEYChigARjDBBgqiAYBkAYI&sclient=gws-wiz-serp
Удачи!
Как я сделала приворот - настоящий мага
(Jeffreynig, 19. 2. 2024 7:29)
Отзыв о привороте, и о маге сделавшем приворот.
+
+
Были проблемы с мужем довольно давно. А в последний год отношения стали сыпаться очень быстро, все разурушилось до конца буквально на глазах. Особенно с появлением любовницы, это была коллега сработы. А у нас двое детей. Их я и сама могла обеспечить более чем! Но вот любила мужа, и хоте, чтобы дети росли с рожным отцом.
Обращалась много к кому, но доверия не было даже при первом общение. Случайно встретились с давней подругой. Разговорились о проблемах. Она посоветовал сильного мага с Дальнего Востока.
Обратилась к нему за приворотом, хотя были конечно сомнения. Звать его Роман Петрович. Берет за работу не сильно много по сравнению с другими, делает все быстро и в срок, не продает и всегда отвечает на возникающие вопросы. Вернул мужа мне за 7 дней, работу проводил 2 дня.
Очень довольна!
________________________
Обратиться к нему можно через сайт https://cmag666.ru или ватсап 8 (984) 286-12-65 - это настоящий маг и просто добрый человек, отлично знающий свое дело!
____________________________________________________________________________________
Сайт ищут по тегам #
# Ясновидящая # маге # отзывы # экстрасенс # гадалка
ангелина волкова фото
константин гецати прием цена
колдун экстрасенс
как определить мага среди людей
гадалка глория
лариса николаевна в контакте
наталья таро ютуб
наталья хард отзывы
алена головина экстрасенс отзывы
от нины васильевны
серафима васильевна гадалка отзывы
лучшая ясновидящая в москве
литвин богданович
сильвия гадалка из перово
маргарита таролог
серафима золотарева гадалка номер телефона
кто настоящий маг в россии
Отзыв о привороте-правда - гадание в германии отзывы
(Donaldshake, 19. 2. 2024 5:02)
Мой опыт обращения к магу с приворотом в Германии - гадалка в германии отзывы
Живу я в небольшом городе в Германии, и найти среди кучи «магов» хорошего, трудно особенно в Германии. Намучилась я с этим очень. И как бывает, все решается на пьяную голову. Сидели с двоюродной сестрой, поведала ей свою проблему с мужем и о бесконечных поисках магов. Она очень удивилась, что я сразу не стала искать человека в России с Якутии или другого региона Дальнего востока – это можно сказать родина многих сильных шаманов и колдунов.
Порекомендовала мага, с которым сама работала. Поработала с ним и я.
Поэтому хотела бы написать отзыв о привороте на мужа, проведенном магом Романом Петровичем.
___________________________________________________________________________
Я хочу поделиться своим опытом использования услуг мага Романа Петровича с сайта https://cmag666.ru Ватсап 8 (984) 286-12-65
___________________________________________________________________________
Перед тем, как обратиться к нему, моя ситуация с мужем казалась мне безвыходной. Наш брак испытывал серьезные трудности, и наши отношения становились все более напряженными.
Мой муж, с которым мы прожили много лет, казался мне все более отстраненным и равнодушным. Он уходил в себя, избегал общения, а наши разговоры становились все реже и поверхностнее. Я испытывала огромную боль от того, что наша семья распадается, и что я теряю своего мужа. В итоге он еще и любовницу завел.
После долгих раздумий и поиска решения проблемы, я решила обратиться к магу Роману Петровичу за помощью.
Он провел для меня приворот на мужа – на все ушло 5 дней, и еще дал ряд простых рекомендаций, которым нужно было следовать до получения результата. Последовали дни ожидания
На 5 день после проведения приворота я почувствовала изменения в поведении мужа. Он стал проявлять больше внимания и заботы, мы снова начали общаться и находить общие интересы. Стали возвращаться чувства и заинтересованность мной как женщиной. Все быстро нормлизовалось в наших отношениях, с любовницей он порвал все контакты.
Сейчас, спустя несколько месяцев после проведения приворота, я вижу, что наш брак стал крепким, стабильным и счастливым, как и раньше! Мы с мужем снова чувствуем себя близкими и любящими людьми.
Я благодарна магу Роману Петровичу (Ватсап 8(984)286-12-65)за его помощь и поддержку в трудный момент!
Теги ясновидящая в германии отзывы - гадалка в германии отзывы
экстрасенсы в германии отзывы - гадалка в германии отзывы 8(984)286-12-65
гадалка в германии отзывы - гадалка в германии отзывы
Seo специалистам на заметку, прогон Bullet это что-то новенькое!
(Michaelmub, 19. 2. 2024 3:10)
Привет всем!
Я начал делать сетку сайтов, все было не в поиске, но прогон Bullet помог
Мой сайт стоял на месте, но данный продукт смог его раскачать
https://www.google.com/search?q=%D1%83%D1%81%D0%BA%D0%BE%D1%80%D0%B5%D0%BD%D0%B8%D0%B5+301+%D1%81%D1%81%D1%8B%D0%BB%D0%BE%D0%BA+%D1%82%D0%B0%D1%80%D0%B8%D1%84+bullet+kwork&sca_esv=46579d9512b829aa&ei=FBTSZa_PDJrbxc8Ppcqo0A0&udm=&ved=0ahUKEwivqYXXjLWEAxWabfEDHSUlCtoQ4dUDCBA&uact=5&oq=%D1%83%D1%81%D0%BA%D0%BE%D1%80%D0%B5%D0%BD%D0%B8%D0%B5+301+%D1%81%D1%81%D1%8B%D0%BB%D0%BE%D0%BA+%D1%82%D0%B0%D1%80%D0%B8%D1%84+bullet+kwork&gs_lp=Egxnd3Mtd2l6LXNlcnAiO9GD0YHQutC-0YDQtdC90LjQtSAzMDEg0YHRgdGL0LvQvtC6INGC0LDRgNC40YQgYnVsbGV0IGt3b3JrSKxFUOElWLgocAJ4AJABAJgB3gGgAaMGqgEFMC4yLjK4AQPIAQD4AQGIBgE&sclient=gws-wiz-serp
https://www.google.com/search?q=%D0%BF%D1%80%D0%BE%D0%B3%D0%BE%D0%BD+%D0%B4%D0%BE%D1%80%D0%BE%D0%B2+bullet+kwork&sca_esv=46579d9512b829aa&ei=_hHSZaflIZKBxc8Psd2i6AY&udm=&ved=0ahUKEwin3MnYirWEAxWSQPEDHbGuCG0Q4dUDCBA&uact=5&oq=%D0%BF%D1%80%D0%BE%D0%B3%D0%BE%D0%BD+%D0%B4%D0%BE%D1%80%D0%BE%D0%B2+bullet+kwork&gs_lp=Egxnd3Mtd2l6LXNlcnAiJNC_0YDQvtCz0L7QvSDQtNC-0YDQvtCyIGJ1bGxldCBrd29yazIJECEYChigARgqSKYVUJ4EWO8ScAN4AJABAZgBrQKgAccNqgEFMi02LjG4AQPIAQD4AQHCAgcQIRgKGKABiAYB&sclient=gws-wiz-serp
Удачи!
Отзыв о привороте- приворот в ростове на дону отзывы
(Thomascam, 18. 2. 2024 15:01)
Мой опыт с приворотом, могу оставить только хороший отзыв - приворот любовный отзывы
Живу я в большом городе, и найти среди кучи «магов» хорошего, трудно. Намучилась я с этим очень. И как бывает, все решается на пьяную голову. Сидели с двоюродной сестрой, поведала ей свою проблему с мужем и о бесконечных поисках магов. Она очень удивилась, что я сразу не стала искать человека с Якутии или другого региона Дальнего востока – это можно сказать родина многих сильных шаманов и колдунов.
Порекомендовала мага, с которым сама работала. Поработала с ним и я.
Поэтому хотела бы написать отзыв о привороте на мужа, проведенном магом Романом Петровичем.
___________________________________________________________________________
Я хочу поделиться своим опытом использования услуг мага Романа Петровича с сайта https://cmag666.ru Ватсап 8 (984) 286-12-65
___________________________________________________________________________
Перед тем, как обратиться к нему, моя ситуация с мужем казалась мне безвыходной. Наш брак испытывал серьезные трудности, и наши отношения становились все более напряженными.
Мой муж, с которым мы прожили много лет, казался мне все более отстраненным и равнодушным. Он уходил в себя, избегал общения, а наши разговоры становились все реже и поверхностнее. Я испытывала огромную боль от того, что наша семья распадается, и что я теряю своего мужа. В итоге он еще и любовницу завел.
После долгих раздумий и поиска решения проблемы, я решила обратиться к магу Роману Петровичу за помощью.
Он провел для меня приворот на мужа – на все ушло 5 дней, и еще дал ряд простых рекомендаций, которым нужно было следовать до получения результата. Последовали дни ожидания
На 5 день после проведения приворота я почувствовала изменения в поведении мужа. Он стал проявлять больше внимания и заботы, мы снова начали общаться и находить общие интересы. Стали возвращаться чувства и заинтересованность мной как женщиной. Все быстро нормлизовалось в наших отношениях, с любовницей он порвал все контакты.
Сейчас, спустя несколько месяцев после проведения приворота, я вижу, что наш брак стал крепким, стабильным и счастливым, как и раньше! Мы с мужем снова чувствуем себя близкими и любящими людьми.
Я благодарна магу Роману Петровичу за его помощь и поддержку в трудный момент!
==============================================================================================================================================================================================
сайт ищут по тегам - приворот месячной кровью отзывы - действуют ли привороты отзывы кто делал - чем опасен приворот отзывы
приворот на мясо собаке отзывы - приворот отзывы у кого получилось приворот на вольт отзывы кто делал
магический приворот на любовь что это
приворот на жену без последствия сразу действует по фото
рецепт приворота по фото
кровь в привороте
школа настоящих магов
порно кукла вуду
приворот по фото ютуб
муж ушел по привороту
экстрасенсы реклама услуг
Приобретите диплом ВУЗа по выгодной цене с доставкой по всей России без предоплаты!
(Josephquelt, 18. 2. 2024 8:08)
Доброго!
Бывало ли у вас такое, что приходилось писать дипломную работу в крайне ограниченные сроки? Это действительно требует высокой степени ответственности и напряженной работы, но важно не унывать и продолжать активно участвовать в учебном процессе, так же, как и я.
Для тех, кто умеет искать и анализировать информацию в интернете, это действительно может быть очень полезным в процессе согласования и написания дипломной работы. Нет необходимости тратить время на походы в библиотеки или встречи с научным руководителем. Здесь предоставлены хорошие данные для дипломных и курсовых работ; вы можете ознакомиться с ними, перейдя по ссылкам
https://diplom1.org/
Желаю всем отличных оценок!
купить диплом в новомосковске
купить диплом в гатчине
купить диплом в ленинск-кузнецком
куплю диплом о высшем образовании
купить диплом в дзержинске
купить диплом в иркутске
купить диплом в усть-илимске
купить сертификат специалиста
купить диплом во владивостоке
купить диплом с внесением в реестр
Мой опыт обращения к магу с приворотом в Германии - ясновидящая в германии отзывы
(CharlesUnfob, 18. 2. 2024 2:51)
Мой опыт обращения к магу с приворотом в Германии - гадалка в германии отзывы
Живу я в небольшом городе в Германии, и найти среди кучи «магов» хорошего, трудно особенно в Германии. Намучилась я с этим очень. И как бывает, все решается на пьяную голову. Сидели с двоюродной сестрой, поведала ей свою проблему с мужем и о бесконечных поисках магов. Она очень удивилась, что я сразу не стала искать человека в России с Якутии или другого региона Дальнего востока – это можно сказать родина многих сильных шаманов и колдунов.
Порекомендовала мага, с которым сама работала. Поработала с ним и я.
Поэтому хотела бы написать отзыв о привороте на мужа, проведенном магом Романом Петровичем.
___________________________________________________________________________
Я хочу поделиться своим опытом использования услуг мага Романа Петровича с сайта https://cmag666.ru Ватсап 8 (984) 286-12-65
___________________________________________________________________________
Перед тем, как обратиться к нему, моя ситуация с мужем казалась мне безвыходной. Наш брак испытывал серьезные трудности, и наши отношения становились все более напряженными.
Мой муж, с которым мы прожили много лет, казался мне все более отстраненным и равнодушным. Он уходил в себя, избегал общения, а наши разговоры становились все реже и поверхностнее. Я испытывала огромную боль от того, что наша семья распадается, и что я теряю своего мужа. В итоге он еще и любовницу завел.
После долгих раздумий и поиска решения проблемы, я решила обратиться к магу Роману Петровичу за помощью.
Он провел для меня приворот на мужа – на все ушло 5 дней, и еще дал ряд простых рекомендаций, которым нужно было следовать до получения результата. Последовали дни ожидания
На 5 день после проведения приворота я почувствовала изменения в поведении мужа. Он стал проявлять больше внимания и заботы, мы снова начали общаться и находить общие интересы. Стали возвращаться чувства и заинтересованность мной как женщиной. Все быстро нормлизовалось в наших отношениях, с любовницей он порвал все контакты.
Сейчас, спустя несколько месяцев после проведения приворота, я вижу, что наш брак стал крепким, стабильным и счастливым, как и раньше! Мы с мужем снова чувствуем себя близкими и любящими людьми.
Я благодарна магу Роману Петровичу за его помощь и поддержку в трудный момент!
Теги ясновидящая в германии отзывы - ясновидящие в германии отзывы
ясновидящая в германии отзывы - экстрасенсы в германии отзывы
кто знает хорошую бабушку в германии отзывы - gadalka v germanii отзывы
NY Times News Today
(DominicGLORI, 17. 2. 2024 23:41)
NY Times News Today coverage of international news, politics, business, technology, science, health, arts, sports and more.
https://www.nytimesnewstoday.com/
Оптовая продажа шин и дисков!
(Asian1Insum, 17. 2. 2024 18:26)
Внешнеторговая компания ООО ЛАЗУРИТ подаёт широкий выбор самых небезызвестных шин для грузовых автомобилей ROYALBLACK T706 245/70R19.5, D318 295/60R22.5, T706 445/65R22.5, S201 235/75R17.5 а также S201 255/70R22.5. Наш огромный выбор охватывает шины повышенной эффективности. Сообщите нам, если вам потребуются шины или вы не уверены, какие шины подойдут для вашего автомобиля. Мы на этом мест, чтобы посодействовать отобрать лучшие шины для вашего автомобиля, для того чтобы обеспечить защиту. Мы также поможем вам уточнить, какие шины будут подходить необходимостям вашего автомобиля и эксплуатации, условий обслуживанья. Загляните https://vk.cc/cuweQL для того чтобы проговорить, насколько хорошо подобранные шины способствуют опять убедить вас полюбить езду! Внешнеторговая компания ЛАЗУРИТ - готова предложить цену в городе Владивосток или в Москве.
Елизавета | ООО ЛАЗУРИТ
Россия, 692913, Приморский край, г.Находка, ул.Минская 6А
Моб. +79143334031 +79242328518 (whatsapp, telegram, wechat) GMT +10
врачевания хворостей хребта
(RicardoCiz, 17. 2. 2024 1:35)
Информация о методах исцеления болезней позвоночника и суставов. Эндодонтия остеохондроза, грыж МПД,
https://spinet.ru радикулита, артрита равно других заболеваний
чешский паспорт
(Arthurdut, 17. 2. 2024 1:27)
https://admsvetlogorie.ru/blog/kak-poluchit-grazhdanstvo-chehii-dlya-rossiyan - чешский паспорт
гражданство чехии
клинки купить
(Kevintob, 16. 2. 2024 12:36)
https://knife-klinok.ru/ - купить клинок для ножа
Клинки и ножи собственной мастерской, где лично изготавливаю с нуля и до готового изделия с 1990 года.
Заказать и купить диплом в России без предоплаты и с гарантией, можно только у Нас с гарантией под ключ
(GeraldCer, 16. 2. 2024 9:39)
Привет всем!
Бывало ли у вас ситуации, когда приходилось писать дипломную работу в крайне сжатые сроки? Это действительно требует огромной ответственности и напряженной работы, но важно не сдаваться и продолжать активно участвовать в учебном процессе, что я и делаю в данный момент.
Для тех, кто умеет ориентироваться и искать информацию в сети, это действительно может оказаться весьма полезным при согласовании и написании дипломной работы. Нет необходимости тратить время на посещение библиотек или проведение встреч с дипломным руководителем. Здесь представлены отличные материалы для дипломных и курсовых работ, на которые вы можете взглянуть, перейдя по ссылкам
https://diplom1.org/
Желаю всем отличных оценок!
купить диплом медсестры
купить аттестаты за 11
купить свидетельство о браке
куплю диплом кандидата наук
купить диплом в невинномысске
купить диплом педагога
купить диплом специалиста
купить диплом энергетика
купить диплом в самаре
купить диплом в новокузнецке
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 19 | 20 | 21 | 22 | 23 | 24 | 25 | 26 | 27 | 28 | 29 | 30 | 31 | 32 | 33 | 34 | 35 | 36 | 37 | 38 | 39 | 40 | 41 | 42 | 43 | 44 | 45 | 46 | 47 | 48 | 49 | 50 | 51 | 52 | 53 | 54 | 55 | 56 | 57 | 58 | 59 | 60 | 61 | 62 | 63 | 64 | 65 | 66 | 67 | 68 | 69 | 70 | 71 | 72 | 73 | 74 | 75 | 76 | 77 | 78 | 79 | 80 | 81 | 82 | 83 | 84 | 85 | 86 | 87 | 88 | 89 | 90 | 91 | 92
Discover a world of online entertainment possibilities! Our platform offers a wide selection of video chats and models.
(NatalieUnmat, 20. 2. 2024 5:01)