I. Genetické minimum - chromozómové choroby a ich diagnostika
Ďurovčíková Darina
Klinika lekárskej genetiky SZU a FNsP, Bratislava
Úvod
Genetické choroby vznikajú v dôsledku mutácii na úrovni génu, alebo väčšej časti genómu, v interakcii s exogénnymi faktormi. Výskyt geneticky podmienených patologických stavov ( tab.1), alebo predispozícia k nim sa podľa viacerých štatistík odhaduje na 12-15% (1,2).
Etiologickú rôznorodosť spôsobujú rôzne typy genetických defektov, detekcia ktorých si vyžaduje špecifické laboratórne metódy (tab.1). V ostatnom čase sme zaznamenali ich významný pokrok, týkajúci sa najmä rozvoja genetických diagnostických testov, ktoré majú priamy dopad na manažment komplexnej starostlivosti o pacientov a rizikových členov rodiny. Pre včasnú diagnostiku a prevenciu genetických ochorení je dôležité vzdelávanie a transfer poznatkov do praxe každého lekára. Potrebe začlenenia najnovších poznatkov z medicínskeho výskumu a genetiky do pregraduálneho a postgraduálneho vzdelávania sú venované osobitné príspevky na blížiacej sa konferencii AMEE (Association of Medical Education in Europe). Forsíruje sa dostupnosť vedomostí s cieľom rozpoznať genotypo-fenotypové korelácie najmä vo vzťahu k liečbe a celkovej zdravotnej starostlivosti (3). Iné asociácie a spoločnosti (ESHG, OECD) odporúčajú vzdelávanie v uvedených oblastiach vrátane genomiky a proteomiky zaradiť aj do mimoprofesného vzdelávania pracovníkov v zdravotníctve ako aj pre širokú laickú verejnosť. Primeraná úroveň vzdelania zbavuje neopodstatnených obáv z genetiky, ktorá je v 21.storočí neoddeliteľnou súčasťou liečebno-preventívnej starostlivosti.
S potešením možno konštatovať, že uvedené odporúčania u nás viac rokov akceptujeme. Otázky genetického testovania, algoritmy genetickej diagnostiky, správnej laboratórnej praxe, etiky a legislatívy v odbore sú náplňou pravidelných školiacich aktivít na SZU.
Zároveň sú pre nás ambíciou zaplniť priestor v tomto periodiku na pokračovanie, ktorého obsahom bude minimum genetických poznatkov. Prvú časť venujeme chromozómovým ochoreniam a prehľadu ich diagnostických metód.
I. Chromozómové choroby
Chromozómové anomálie pozorujeme ako zmeny na chromozómoch , ktoré môžu byť :
- vrodené (konštitučné)
- získané (v priebehu života napr. malígnym procesom v bunke).
Vrodené chromozómové anomálie spôsobujú zmenou počtu, alebo štruktúry chromozómov génovú nerovnováhu a upozornia na seba závažnou poruchou morfogenézy. Pre autozómové anomálie je typický výskyt VVCH spolu s mentálnou retardáciou (obr.1). Anomálie pohlavných chromozómov sprevádzajú poruchy rastu a somatosexuálneho vývinu a sú z klinického hľadiska menej závažné. Vyhľadávanie ich zvýšeného rizika sa uskutočňuje celoplošným prenatálnym biochemický skríningom ( sAFP a betaHCG ) u tehotných žien v rozmedzí 16-18 týždňa gravidity. Vrodené a získané chromozómové anomálie potvrdíme cytogenetickým vyšetrením pri ktorom sa stanoví karyotyp. Výskyt chromozómových chýb v populácii živorodených je cca 1% (2.4).
Diagnostické známky na klinickej úrovni
Na chromozómové ochorenia u novorodenca upozorňuje prítomnosť vrodených vývinových chýb (VVCH) , ktoré sú zastúpené v ich etiológii cca 5%. Signálmi pre chromozómovú anomáliu bývajú nevysvetliteľná polystigmatizácia, tonusové poruchy, rôzne patologické parametre zistené prenatálnym ultrazvukovým vyšetrením plodu ako sú: mikrocefalia, zhrubnutá nuchálna riasa, rastová retardácia a rôzne orgánové anomálie a iné. Neskôr to býva mentálna retardácia, zaostávanie rastu, pubertálneho vývinu, nástupu menštruácie a iné. V dospelosti sa konštitučná chromozómová anomália diagnostikuje skôr výnimočne. Ich záchyt pozorujeme pri vyšetrení párov pre poruchy fertility a reprodukcie v podobe anomálií pohlavných chromozómov, zriedkavých foriem malých gonozómových mozaík a vyvážených chromozómových prestávb.
Charakteristika a rozdelenie
Predstavujú odchylky od normálnej chromozómovej výbavy somatickej bunky, ktorá obsahuje 22 párov autozómov (1-22 ) a pár pohlavných chromozómov – gonozómov (XX, alebo XY). Najčastejšou príčinou vzniku aneuploidie je nondisjukcia, alebo patologické rozdelenie chromozómov v meióze, ktoré vzniká prezygoticky. Zriedkavo sú dôsledkom postzygotickej poruchy mitotického bunkového delenia. Tieto javy sú väčšinou náhodné, aj keď sa pripúšťa, že určité rodiny môžu mať sklon k nondisjuncii (asynchrónne delenie pri predčasnom delení centroméry). Len istá malá časť chromozómových anomáli vzniká zákonite v dôsledku vyvážených anomálií (prestavieb chromozómov), ktoré sa vyskytujú v populácii ich zdravých prenášačov s frekvenciou menej ako 0,2% (4)
Rozdelenie podľa (I a II) zohľadňuje typy chromozómov a konkrétne zmeny.
I. Rozdelenie podľa typu chromozómov
A./ AUTOZÓMOVÉ
B./ GONOZÓMOVÉ
II. Podľa typu zmien v počte a štruktúre chromozómov:
a/ numerické - odchýlky od normálneho počtu diploidnej sady chromozómov somatickej bunky. Môže ísť nadpočetný chromozóm z páru ( trizómia ), chýbajúci ( monozómia ), dva nadpočetné chromozómy z páru ( tetrazómia ) , násobky sady chromozómov ( triploidie ) a iné odchylky od normálneho počtu (aneuploidie ). Z autozómových anomálií k nim patrí trizómia 21 - Downov syndróm. Ide o najčastejšiu chromozómovú anomáliu, ktorej výskyt populácii je od od 1:750-1000 živorodených. Medzi ďaľšie zvyčajne neonatálne letálne trizómie patria Patauov ( trizómia 13 ) a Edwardsov ( trizómia 18 ) syndróm.
Trizómia môže byť voľná, náhodná forma s nízkym rizikom rekurencie, alebo translokačná. Táto mohla vzniknúť ako mutácia de novo, alebo dôsledkom vyváženej translokácie jedného z rodičov. Z gonozómových anomálií má najčastejší výskyt monozómia X, alebo Turnerov ( karyotyp 45,X0 ) a Klinefelterov syndróm ( karyotyp 47,XXY), ktoré sa zisťujú v čistej, alebo mozaikovej forme. Výskyt vybraných chromozómových anomálií je v tabuľke č.2.
b/ štruktúrové - charakterizuje zmena štruktúry chromozómu vizualizovateľné ako prestavby krátkeho (p) a / alebo dlhého ramienka (q) chromozómu. Patria sem chýbanie určitého úseku chromozómu (delécia), alebo zmnoženie (duplikácia) istého úseku chromozómu. Ďalej sú to premiestnenie časti chromozómu na iný (translokácia), alebo iné tvarové zmeny chromozómov ( prstencový chromozóm, izochromozóm). Príkladom autozómovej štruktúrovej anomálie je syndróm mačacieho plaču (Cri-de-Chat sy ), ktorý spôsobuje delécia úseku krátkeho ramienka chromozómu č.5 (obr.2) Zjednodušený zápis karyotypu u chlapca s týmto syndrómom je 46,XY, 5p-. Z gonozómových anomálií sa pomerne často vyskytuje prstencový chromozóm X - karyotyp 45,X r(X), alebo izochromozóm, ktorý sa u ženy manifestuje ako Turnerov syndróm (5). Submikroskopické zmeny, kryptické translokácie nie sú možné touto metódou obsiahnúť.
c/ mozaiky: predstavujú prítomnosť viacerých bunkových klonov s rozdielnou chromozómovou výbavou. Pozorujeme ich v bunkách ako rôzne chromozómové línie, nezriedka ako minoritné, s frekvenciou menšou ako 10%. Na ich detekciu je potrebné zhodnotiť väčšie množstvo mitotických figúr. Časté sú napríklad mozaikové formy Turnerovho syndrómu, Klinefelterovho syndrómu. U týchto pacientov teda nájdeme v bunkách karyotyp s normálnym a patologickým chromozómovým nálezom. Zápis karyotypu obsahuje viacero línii a začína sa zvyčajne najpočetnejšie zastúpenou. Mozaika Turnerovho syndrómu môže mať aj takýto nezvyčajný karyotyp ( 45,XO/46,XX/46,XY ). V tomto prípade prevažuje línia s chýbajúcim X chromozóm, prítomná je aj normálna a minoritná s prítomnosťou Y chromozómu. Existujú aj iné varianty s prstencovým, alebo s izochromozómom.
Genetické diagnostické testy
Chromozómové anomálie najčastejšie diagnostikujeme laboratórnymi technikami, ktoré poskytujú kompletnú analýzu karyotypu. V ostatnom čase sa klasické metódy identifikácie chromozómov dopĺňajú o nové zobrazovacie metódy, ktorými sa odhaľujú predtým nepoznané prestavby na submikroskopickej úrovni (5,6).
Klasická metóda cytogenetického vyšetrenia je založená na analýze metafázových chromozómov získaných mitotickým delením kultivovaných lymfocytoch, ktoré sa farbia konvenčne a prúžkovacími metódami (C, G, R, Q). Detekuje numerické a štruktúrové anomálie na úrovni do 550 bandov. Vyššiu rozlišovaciu schopnosť dosiahneme metódou HRT (High resolution method), kde sa hodnotia dlhšie prometafázické chromozómy. Vyšetrenie karyotypu touto metódou vyžaduje odbornú skúsenosť a pre jej náročnosť ju nahrádzajú iné modernejšie metódy farebnej cytogenetiky (6).
Klasická cytogenetika sa rutinne využíva v diagnostike konštitučných chromozómových anomálií u pacientov s vrodenými vývinovými chybami (VVCH), mentálnou retardáciou ( MR ), poruchami rastu a pohlavného vývinu, alebo pri opakovaných spontánnych potratov. V neposlednej rade aj v prenatálnej diagnostike u plodu, ktorá sa uskutočňuje po stanovení ich rizika klinickým genetikom. Gonozómové anomálie, najmä v nizkopercentnej mozaikovej forme (Turnerov, Klinefelterov syndróm) sa môžu výnimočne diagnostikovať až pri poruchách reprodukcie v dospelom veku. Klasická metóda umožní záchyt štruktúrových anomálií a mnohonásobných chromozómových prestávb, ktoré sú typické pre syndrómy chromozómovej instability s rizikom malignity. Príkladom sú Fanconiho anémia, Ataxia teleangiektázia, Nijmegenský syndróm a iné. Manifestujú sa zvýšenou lomivosťou chromozómov. Najčastejšie sa pri týchto syndrómov zistí instabilná chromozómová translokácia 7/14, spolu s inými štruktúrovými zmenami a figúrami ( gapy, breaky, triradiály, kvadruradiály), ktoré bývajú v rôznom percentuálnom zastúpení (obr.3).
Fluorescenčná in situ hybridizácia ( FISH ) metóda používa metódy molekulovej cytogenetiky. Umožní diagnostiku chromozómových prestávb na submikroskopickej úrovni ( < 800 bandov ), ktoré nie sú vizualizovateľné klasickou technikou . Ide najmä o mikrodelečné a mikroduplikačné syndrómy a pomáha tiež odhaliť nízkopercentné mozaiky. Princípom je detekcia signálov po hybridizácii pacientovej chromozómovej DNA so špecifickými sondami (centromerickými, celochromozómovým, alebo lokusovo špecifickými) použitými podľa potreby (obr.4 ). Centromerické sondy sa používajú na zisťovanie numerických chromozómových chýb s dôkazom prítomnosti centromér, telomerických sekvencií a obsahu heterochromatínu. Celochromozómové sondy hybridizujú so svojim homológom pozdĺž celého chromozómu. Sú vhodné na diagnostiku štruktúrových anomálií chromozómov ako sú translokácie, delécie, inverzie. Lokusovo špecifické, alebo génové sondy hybridizujú do oblasti hľadaných konkrétnych sekvencii. Tento typ sond, veľkosti cca 150 kb, sa využíva k diagnostike mikrodelečných syndrómov ako sú napríklad najznámejšie z nich ( Praderov-Williho, Angelmanov, Di-Georgov, Wiliamsov-Beuerenov). Výhodou tejto metódy je hodnotenie signálov na väčšom počte chromozómov aj bunkových jadier. Použitie FISH a iných DNA metód detekujúcich sekvencie v oblasti SRY chromozómu Y umožňuje pri mozaikových formách Turnerovho syndrómu vyhľadávať pacientky s rizikom gonadoblastómu.
Kombinácia klasických a molekulovo cytogenetických metód sa využíva v onkogenetike pri diagnostike a liečbe hemoblastóz, vrátane monitorovania reziduálnej choroby a postransplantačných stavoch. Chronickú myeloickú leukémiu potvrdzuje výskyt chromozómu Philadelphia, ktorý vzniká v dôsledku translokácie medzi dlhými ramenami
Iné modifikované techniky
CGH - Komparatívna genómová hybridizácia je založená na porovnávaní dvoch fluorescenčne značených vzoriek DNA ( referenčnej a pacientovej), ktoré hybridizujú s normálnymi metafázovými chromozómami. Pacientová testovaná DNA je značená zeleným flurochrómom a referenčná vzorka ( DNA od zdravého jedinca s normálnym karyotypom ) sa označuje červeným. V pomere 1:1 sa obidve nechajú hybridizovať na preparáte s normálnymi chromozómami. Nerovnováhu v testovanej vzorke zistíme vyhodnotením pomeru intenzity zelenej a červenej fluorescencie pomocou špeciálneho softwaru. Využíva sa v nádorovej cytogenetike na skrínovanie chromozómovej nerovnováhy. Metóda však presnejšiu identifikáciu prestavby neumožňuje.
Multicolor FISH- mnohonásobná farebná fluorescentná in situ hybridizácia K detekcii zmien sa používa zmes rozdielne značených sond 5 fluorochrómami a ich vzájomnou kombináciou, čím sa docieli rozlíšenie všetkých chromozómov. Na vyhodnotenie je potrebná digitálna zobrazovacia mikroskopia s filtrami, CCD kamera a počítačový software k analýze obrazu. Na základe fluorochrómovej kompozície sa každému chromozómu určí tzv.pseudofarba..Táto metóda sa používa na identifikáciu zložitejších translokácií a prestavieb medzi viacerými chromozómami. Neumožňuje detekciu vnútrochromozómových zmien typu inverzií a malých delécií.
SKY - spektrálne karyotypovanie je variantom mnohofarebnej FISH, každému chromozómu je tiež pridelená pseudofarba. Kombinuje snímanie obrazu trojakým filtrom CCD kamerou s Fourierovou spektroskopiou a príslušným počítačovým programom.
mBAND - metóda mnohonásobného pruhovania - je založená na podobnom princípe ako FISH. Podstatou m.-pruhovania je označenie jedného chromozómu viacerými značenými sondami. V kombinácii sa tiež používa 5 fluorochrómov. Každá sonda hybridizuje s inou časťou chromozómu. Na základe hybridizačných signálov dochádza k tvorbe priečnych farebných pruhov po celej dĺžke chromozómu.
Záver: Zlatým štandardom klinickej cytogenetiky je vyšetrenie karyotypu klasickou metódou. S pribúdajúcimi dôkazmi o výskyte submikroskopických chromozómových zmien, kryptických prestávb modernými laboratórnymi technikami sa zvyšuje pravdepodobnosť odhaliť kauzálnu súvislosť s etiologicky neobjasnenou mentálnou retardáciou a polystigmatizáciou.
Literatúra:
1. Smith, C. J., Donnai , D.: Human malformation. In: Emery and Rimon´s Principles and Practice of Medical Genetics. 3.vyd. New-York: Churchill Livingstone, 1998, s. 687 - 696.
2. Thompson and Thompsonová : Genetics in medicine, W.B.Saunders company, 6-th Ed., 2001, s.443.
3. Internetové adresy: www.amee.org
4. VOGEL, F., MOTULSKY, A.G. Human Genetics. 3. vyd .Berlin-Heidelberg: Springer - Verlag , 1997, s 370 -376 .
5. Izakovič V. a kolektív: Cytogenetika v klinickej endokrinológii., Osveta Martin, 1972, 320 s.
6. Černáková I., Ďurovčíková D., Brozmanová, M.: De novo tandem duplication 15q21-26 identified by FISH. Cytogenet.Cell. Genet.,Vol.85,1999, Suppl.1., s.144
Tab.1 Geneticky podmienené patologické stavy
Chromozómové ( 0,6 – 0,9 %)
Monogénové ( 0,8% )
AD, AR, X-viazané
Multifaktoriálne ( polygénne dedičné)
a/ izolované VVCH ( 3-5% )
b/ choroby dospelého veku ( 5% )
Genetické poruchy somatických buniek
Mitochondriálne dedičné
____________________________________________
Celkový výskyt v populácii živorodených : 12 -15%
Tab. 2 Populačná frekvencia chromozómových syndrómov
( na 1000 živorodených )
Trizómia 21 (Downov ) |
1,5 |
Trizómia 18 (Edwardsov ) |
0,12 |
Trizómia 13 (Patauov) |
0,07 |
47,XXY (Klinefelterov) |
1,5 |
45,X (Turnerov ) |
0,4 |
XYY sy |
1,5 |
XXX sy |
0,65 |
Komentáře
Přehled komentářů
На сайте PKP-RMS - https://pkp-rms.ru, вы сможете выбрать из большого ассортимента, насчитывающего более 1000 наименований товаров. Наша компания - один из крупнейших дистрибьютор в России, специализирующийся на поставке высококачественных материалов как для производственных, так и научно-исследовательских целей. Наш каталог товаров - это обширный источник информации о продуктах для любого бизнеса.
Наша продукция:
- Алюминий фторид: https://pkp-rms.ru/catalog/neorganicheskie-soedineniia/aliuminii-ftorid/
- Молибден (V) хлорид: https://pkp-rms.ru/catalog/neorganicheskie-soedineniia/molibden-v-khlorid/
- Стронций карбонат: https://pkp-rms.ru/catalog/neorganicheskie-soedineniia/strontsii-karbonat/
- Тулий (III) нитрат гексагидрат: https://pkp-rms.ru/catalog/neorganicheskie-soedineniia/tulii-iii-nitrat-geksagidrat/
- Празеодим (III) иодид: https://pkp-rms.ru/catalog/neorganicheskie-soedineniia/prazeodim-iii-iodid/
Hey there, cool cats! It's your favorite chill capybara!
(Davidzes, 5. 11. 2023 13:31)
"Hey there, cool cats!
It's your favorite chill capybara, and I've got a proposition that's bound to make your hearts race with excitement. You know how we capybaras like to keep things mellow and relaxed, right? Well, I've found the ultimate way to do just that while riding the waves of adventure – it's time to surf in Bali!
Bali, the surfer's haven, where endless waves roll in, inviting us to ride the ocean's rhythm. The sun-drenched beaches, swaying palm trees, and the salty kiss of the sea breeze are a paradise for any water enthusiast. Whether you're a seasoned pro or a total newbie, Bali's waves are ready to embrace you.
Surfing isn't just a sport; it's a way of life. There's something utterly enchanting about catching the perfect wave, feeling the surge of the ocean beneath you, and riding the crest like a king or queen of the sea. It's all about balance, harmony, and connecting with nature. It's the kind of magic that brings us peace and excitement all at once.
Look here - https://kokomail.site/
But it's not just about the surf. Bali is a tropical wonderland filled with vibrant culture, mouthwatering cuisine, and breathtaking sunsets that paint the sky in hues you won't believe until you see them. The nightlife is electric, and the people are as warm and inviting as the ocean itself.
So, here's the deal: I'm extending an open invitation to all of you. Let's pack our bags, grab our boards, and head to Bali for an epic surfing adventure. I promise you, it's a journey that will leave you with unforgettable memories, new friends, and a deeper connection to the ocean and its wild beauty.
Join me, your capybara surf guru, for an extraordinary experience in Bali. Life is too short to miss out on the good stuff, and I'm here to make sure you experience the raddest, most gnarly side of life.
Catch you on the waves, my friends! ??????"
very interesting, but nothing sensible
(TimothyBoisk, 4. 11. 2023 14:13)Thanks, I've been looking for this for a long time
Купить Кокаин в Киеве? САЙТ - KOKS.TOP Купить Кокаин Киев? САЙТ - KOKS.TOP
(TimothiyDyere, 1. 11. 2023 7:05)
Купить Кокаин в Киеве? САЙТ - KOKS.TOP Купить Кокаин Киев? САЙТ - KOKS.TOP
ДОСТАВКА ТОВАРА В РУКИ - https://koks.top/
ЗАКАЗЫ ОНЛАЙН ЧЕРЕЗ ТЕЛЕГРАММ - https://koks.top/
ЗАКЛАДКИ ОНЛАЙН НА САЙТЕ - https://koks.top/
ССЫЛКА ДЛЯ СВЯЗИ С ОПЕРАТОРОМ - https://koks.top/
КУПИТЬ КОКАИН ОНЛАЙН С ДОСТАВКОЙ - https://koks.top/
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
Теги поисковых слов для запроса "Купить Кокаин в Киеве"
Сколько Стоит Кокаин в Киеве в розницу? Кто обычно покупает Кокаин в Киеве? Как изготавливают Кокаин который можно купить в Киеве?
Сколько лет уже продают качественный Кокаин в Киеве закладками? Как можно купить Кокаин в Киеве с доставкой в руки?
Надежность покупок Кокаина в Киеве с максимальной скоростью доставки товарна в руки? Какой минимальный заказ покупки Кокаина в Киеве при заказе онлайн?
Самый быстрый способ Купить Кокаин в Киеве без посредников? Купить кокаин в киеве на прямую без третьих лиц? Сколько нужно грамм для употребления Кокаина в Киеве?
Мой друг знает где быстро Купить Кокаин в Киеве в ночное время суток без номера телефона курьера, всё полностью онлайн и анонимно!
Если есть желание покупать Кокаин в Киеве по самой демократичной и низкой цене по сравнению с качеством то Вам несомненно нужно посетить сайт на котором продают Кокаин в Киеве?
Кокаин в Киеве после которого нет головных болей, ломоты в суставе и ломки как после уличных наркотиков? Бесплатная доставка Кокаина в Киеве по средах каждого месяца!
Мелкие и крупные покупки Кокаина в Киеве, Оптом Кокаин в Киеве? В розницу Кокаин в Киеве? Всё это без проблем может обеспечить всего один сайт в кратчайшие сроки!
Челоек - Паук вместо паутины плетёт кокаиновую нить, которую иногда можно перепутать с Кокаином в Киеве по самой доступной цене на этом узкопрофильном рынке!
Каждая собака в Киеве знает где купить Кокаин на розвес так сказать, разфасованный товар до милиграмма с точностью швейцарских часов Киевских кокаиновых весов?
Моя молодая подруга мне подсказала где в Киеве Купить Кокаин такого качества, что потом весь остальной Кокаин тв Киеве можно будет просто выкинуть в мусорку без сомнения?
Наш Кокаин в Киеве- просто перчик? Про такой Кокаин в Киеве даже соченили уже репчик? Какие молодцы люди, которые понимают в качестве и основных ингредиентах приготовления такого Кокаина в Киеве?
Меня на улице спросили - Где же мы Можем Купить Кокаин в Киеве? И я с гордостью ответил - Кокаин в Киеве вы всегда можете преобрести онлайн на официальном доверенном сайте который продает Кокаин в Киеве.
Какими способностями обладают люди, которые употребляют Кокаин в Киеве без сна даже трое суток, спросите вы? А я отвечу - спустя даже три дня человек употребивший Кокаин в Киеве чувствует прилив сил и бодрость!
Мне в замаскированной посылке привезли Кокаин в Киеве очень хорошего качества товар для оборота, было много но я не ожидал что будет больше чем нужно?
Общие Теги для Гугл бот - Купить Шишки в Киеве, Купить экстази в Киеве , Купить гашиш в Киеве, Купить мефедрон в Киеве, Купить экстази в Киеве, Купить МДМА в Киеве,
Купить лсд в Киеве, Купить Амфетамин в Киеве, Купить скорость альфа ПВП в Киеве, Купить гидропонику в Киеве, Купить метамфетамин в Киеве, Купить эйфоретики в Киеве,
Купить закладки в Киеве, Купить ШИШКИ закладкой в Киеве , Купить Стимуляторы в Киеве, Купить Галлюцыногены в Киеве. Тег окончен
Кокаин Ташкент? Сайт - MEFEDRON.PRO Купить Кокаин Ташкент - MEFEDRON.PRO
(Victordafalay, 28. 10. 2023 23:14)
Кокаин Ташкент? Сайт - MEFEDRON.PRO Купить Кокаин Ташкент - MEFEDRON.PRO
.
Для Заказа Кокаин в Ташкенте САЙТ - https://mefedron.pro/
Купить в Ташкенте Кокаин закладкой САЙТ - https://mefedron.pro/
Заказать Кокаин в Ташкенте доставкой САЙТ - https://mefedron.pro/
Покупка в руки Кокаин в Ташкенте САЙТ - https://mefedron.pro/
Лучший Кокаин в Узбекистане САЙТ - https://mefedron.pro/
Качественный Кокаин в Ташкенте САЙТ - https://mefedron.pro/
.
.
.
..
ДЛЯ ЗАКАЗА ТОВАРА В УЗБЕКИСТАНЕ НУЖНО НАПИСАТЬ НА САЙТ - https://mefedron.pro/ (MEFEDRON.PRO)
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
Теги для гугла - Купить Кокаин Ташкент, Купить Кокаин Самарканд, Купить Кокаин Бухара, Купить Кокаин Хива, Купить Кокаин Шахрисабз,
Купить Кокаин Муйнак, Купить Кокаин Заамин, Купить Кокаин Термез, Купить Кокаин Гулистан, Купить Кокаин Нукус, Купить Кокаин Наманган,
Купить Кокаин Карши, Купить Кокаин Навои, Купить Кокаин Коканд, Купить Кокаин Андижан, Купить Кокаин город Фергана оптом и в розницу!
Купить Кокаин в Ташкенте, Ташкент Лучший Кокаин Купить, Какой Кокаин в Ташкенте Купить? Легкий Кокаин Ташкент Цена?
Сколько стоит Кокаин в Узбекистане? Способы употребления Кокаин в Ташкенте? Как без палева забрать закладку в Ташкенте?
Лабораторный Кокаин в Ташкенте по какой цене можно купить? Оптовые и Розничные Фассовки Кокаин в Ташкенте? Ташкеин и Кокаин это братья?
Мне как человеку с опытом нужен Кокаин в Ташкенте, но только быстро. Как правильно хранить Кокаин в Ташкенте в домашних условиях?
Все кто любит Кокаин в Ташкенте - знают где его можно купить без проблем! Различные способы фассоки Кокаин в Ташкенте!
В каком районе можно Купить Кокаин в Ташкенте без проблем и заморочек? Нужно Купить Кокаин в Ташкенте Закладкой Магнит?
Целебные свойства лекарства под названием "Кокаин в Ташкенте" по сниженной цене сейчас доступен каждому покупателю без ограничений?
Мне очень нужен Кокаин в Ташкенте, потому что моя сестра заболела и не может принимать лекарства без Кокаина в Ташкенте.
Все кто способен Купить Кокаин в Ташкенте закладками прикопами или магнитами могут это сделать моментально через круглосуточный магазин Ташкент.
.
.
.
ТАШКЕНТ - УЗБЕКИСТАН - КОКАИН - ЗАКЛАДКИ- ДОСТАВКА- ГАРАНТИИ - КУПИТЬ - КРУГЛОСУТОЧНО - ЛЮБОЙ РАЙОН - УЗБЕКИСТАН
.
.
.
Конец тегов.
The Ultimate Casino Experience: GAMA's Gamblers' Paradise
(StevenMug, 27. 10. 2023 23:37)
Welcome to Casino GAMA - where excitement meets unique entertainment!
Discover an exhilarating world of games, luxury, and unforgettable winnings. Join
us now and experience the luck that can change your life!
https://bit.ly/45tSDpr Casino GAMA
https://bit.ly/3rUQCEU Casino CatCasino
https://bit.ly/3CAV6Ce A remote server couldn't be cheaper!!!
действие приворота на секс - действие приворотов на фотографию
(Matthewlow, 27. 10. 2023 22:56)
привороты на секс для себя
привороты сильные в нижнем
с другой женщиной приворот
приворот на несовершеннолетнего
снять приворот от мужа
приворот по имени отца
гадалки на приворот в москве
приворот до 1000
сделать приворот у ведьмы
приворот по фото из контакта
приворот девушки к своему сыну
вернуть мужа без приворота
приворот на любовь и скуку
приворот ссора
отомстить за приворот
https://privorot-magiya.ru
приворот на бывшего мужа с фото
приворот девушки за один раз
приворот любимого ритуал
быстрый приворот на любовь мужчины без фото
приворот сделанный парнем на девушку
помогите в привороте мужчины
приворот с телефона фото
чувства человека при любовном привороте
приворот на пентаклей
приворот на любовь и скуку
сильный приворот у мусульман
маг в минске приворот
приворот на дружбу и симпатию
приворот парень вернулся
любовный приворот на расстоянии по фото
жена хочет снять свой приворот с мужа
приворот чтобы муж не ушел от жены к
приворот на не любящего тебя парня
снятие приворота по фотографии с сына
сделать приворот возврат любимого
наказание при привороте мужчин
приворот по результату оплата в контакте
привороты на расстоянии и по фото
привороты на парня чита
действующий и проверенный приворот
снять приворот от бывшей девушки с любимого
приворот и секс
на отца сделали приворот
сильный откат от приворота
черный приворот через сколько
Гашиш Ташкент? Сайт - MEFEDRON.PRO Купить Гашиш Ташкент - MEFEDRON.PRO
(Zacharyfwek, 26. 10. 2023 13:16)
Гашиш Ташкент? Сайт - MEFEDRON.PRO Купить Гашиш Ташкент - MEFEDRON.PRO
.
Для Заказа Гашиш в Ташкенте САЙТ - https://mefedron.pro/
Купить в Ташкенте Гашиш закладкой САЙТ - https://mefedron.pro/
Заказать Гашиш в Ташкенте доставкой САЙТ - https://mefedron.pro/
Покупка в руки Гашиш в Ташкенте САЙТ - https://mefedron.pro/
Лучший Гашиш в Узбекистане САЙТ - https://mefedron.pro/
Качественный Гашиш в Ташкенте САЙТ - https://mefedron.pro/
.
.
.
..
ДЛЯ ЗАКАЗА ТОВАРА В УЗБЕКИСТАНЕ НУЖНО НАПИСАТЬ НА САЙТ - https://mefedron.pro/ (MEFEDRON.PRO)
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
Теги для гугла - Купить Гашиш Ташкент, Купить Гашиш Самарканд, Купить Гашиш Бухара, Купить Гашиш Хива, Купить Гашиш Шахрисабз,
Купить Гашиш Муйнак, Купить Гашиш Заамин, Купить Гашиш Термез, Купить Гашиш Гулистан, Купить Гашиш Нукус, Купить Гашиш Наманган,
Купить Гашиш Карши, Купить Гашиш Навои, Купить Гашиш Коканд, Купить Гашиш Андижан, Купить Гашиш город Фергана оптом и в розницу!
Купить Гашиш в Ташкенте, Ташкент Лучший Гашиш Купить, Какой Гашиш в Ташкенте Купить? Легкий Гашиш Ташкент Цена?
Сколько стоит Гашиш в Узбекистане? Способы употребления Гашиш в Ташкенте? Как без палева забрать закладку в Ташкенте?
Лабораторный Гашиш в Ташкенте по какой цене можно купить? Оптовые и Розничные Фассовки Гашиш в Ташкенте? Ташкеин и Гашиш это братья?
Мне как человеку с опытом нужен Гашиш в Ташкенте, но только быстро. Как правильно хранить Гашиш в Ташкенте в домашних условиях?
Все кто любит Гашиш в Ташкенте - знают где его можно купить без проблем! Различные способы фассоки Гашиш в Ташкенте!
В каком районе можно Купить Гашиш в Ташкенте без проблем и заморочек? Нужно Купить Гашиш в Ташкенте Закладкой Магнит?
Целебные свойства лекарства под названием "Гашиш в Ташкенте" по сниженной цене сейчас доступен каждому покупателю без ограничений?
Мне очень нужен Гашиш в Ташкенте, потому что моя сестра заболела и не может принимать лекарства без Гашиш в Ташкенте.
Все кто способен Купить Гашиш в Ташкенте закладками прикопами или магнитами могут это сделать моментально через круглосуточный магазин Ташкент.
.
.
.
ТАШКЕНТ - УЗБЕКИСТАН - ГАШИШ - ЗАКЛАДКИ- ДОСТАВКА- ГАРАНТИИ - КУПИТЬ - КРУГЛОСУТОЧНО - ЛЮБОЙ РАЙОН - УЗБЕКИСТАН
.
.
.
Конец тегов.
Полиэтиленовая упаковка для бизнеса
(Hian_bfMn, 25. 10. 2023 18:08)
Заказ полиэтиленовой упаковки для бизнеса
https://ivanovo.musornye-meshki.ru/dlya-medicinskix-otxodov/
Полиэтиленовая упаковка для бизнеса
(Hian_bfMn, 25. 10. 2023 18:06)
Заказ полиэтиленовой упаковки для бизнеса
https://ivanovo.musornye-meshki.ru/dlya-medicinskix-otxodov/
Полиэтиленовая упаковка для бизнеса
(Hian_bfMn, 25. 10. 2023 18:06)
Заказ полиэтиленовой упаковки для бизнеса
https://ivanovo.musornye-meshki.ru/dlya-medicinskix-otxodov/
Полиэтиленовая упаковка для бизнеса
(Hian_bfMn, 25. 10. 2023 18:04)
Заказ полиэтиленовой упаковки для бизнеса
https://ivanovo.musornye-meshki.ru/dlya-medicinskix-otxodov/
Полиэтиленовая упаковка для бизнеса
(Hian_bfMn, 25. 10. 2023 18:01)
Заказ полиэтиленовой упаковки для бизнеса
https://ivanovo.musornye-meshki.ru/dlya-medicinskix-otxodov/
Domácí úkoly a váš duševní stav, existuje nějaká souvislost?
(Janasof, 24. 10. 2023 19:36)
Ahoj všichni!
Jmenuji se Jana, žiji ve Švédsku, krásná blondýna, jak se sluší Švédkám)
Mám děti, nastal čas školních úkolů a lekcí a začala opravdová hrůza (((
Neustálé poruchy spánku, nervy, kontroly a známky ve škole..
Dokonce jsem přestala spát s manželem, jen nemám náladu. Dobře známá poradila stránky s domácími úkoly, kde můžete najít odpovědi a rychle řešit lekce a věnovat se svým oblíbeným aktivitám!
Mimochodem, dobrý web
https://www.hometask.ru/anglijskij-4-klass-domashnee-zadanie-rabochaja/
https://www.hometask.ru/gotovoe-domashnee-zadanie-matematika-6-klass-2/
https://www.hometask.ru/kak-otpravit-domashnee-zadanie-v-dnevnik-ru/
https://www.hometask.ru/domashnee-zadanie-po-nemecki/
https://www.hometask.ru/matematika-rabochaja-tetrad-2-klass-domashnee/
https://www.hometask.ru/domashnee-zadanie-5-klass-po-russkomu-jazyku/
https://www.hometask.ru/domashnee-zadanie-russkij-jazyk-3-klass-bajkova/
Žádné reklamy,pohodlné vyhledávání a mnoho cenných informací o kontrolách!
Abych byla upřímná, začala jsem v klidu spát, obnovil se sex a klid v rodině, děkuji takovým místům, kde lze najít řešení a být svobodná!
Hodně štěstí!
Амфетамин Ташкент? Сайт - MEFEDRON.PRO Купить Амфетамин Ташкент - MEFEDRON.PRO
(CalvinimKEymn, 22. 10. 2023 11:27)
Амфетамин Ташкент? Сайт - MEFEDRON.PRO Купить Амфетамин Ташкент - MEFEDRON.PRO
.
Для Заказа Амфетамина в Ташкенте САЙТ - https://mefedron.pro/
Купить в Ташкенте Амфетамин закладкой САЙТ - https://mefedron.pro/
Заказать Амфетамин в Ташкенте доставкой САЙТ - https://mefedron.pro/
Покупка в руки Амфетамин в Ташкенте САЙТ - https://mefedron.pro/
Лучший Амфетамин в Узбекистане САЙТ - https://mefedron.pro/
Качественный Амфетамин в Ташкенте САЙТ - https://mefedron.pro/
.
.
.
..
ДЛЯ ЗАКАЗА ТОВАРА В УЗБЕКИСТАНЕ НУЖНО НАПИСАТЬ НА САЙТ - https://mefedron.pro/ (MEFEDRON.PRO)
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
Теги для гугла - Купить Амфетамин Ташкент, Купить Амфетамин Самарканд, Купить Амфетамин Бухара, Купить Амфетамин Хива, Купить Амфетамин Шахрисабз,
Купить Амфетамин Муйнак, Купить Амфетамин Заамин, Купить Амфетамин Термез, Купить Амфетамин Гулистан, Купить Амфетамин Нукус, Купить Амфетамин Наманган,
Купить Амфетамин Карши, Купить Амфетамин Навои, Купить Амфетамин Коканд, Купить Амфетамин Андижан, Купить Амфетамин город Фергана оптом и в розницу!
Купить Амфетамин в Ташкенте, Ташкент Лучший Амфетамина Купить, Какой Амфетамин в Ташкенте Купить? Легкий Амфетамин Ташкент Цена?
Сколько стоит Амфетамин в Узбекистане? Способы употребления Амфетамин в Ташкенте? Как без палева забрать закладку в Ташкенте?
Лабораторный Амфетамин в Ташкенте по какой цене можно купить? Оптовые и Розничные Фассовки Амфетамина в Ташкенте? Ташкеин и Амфетамин это братья?
Мне как человеку с опытом нужен Амфетамин в Ташкенте, но только быстро. Как правильно хранить Амфетамин в Ташкенте в домашних условиях?
Все кто любит Амфетамин в Ташкенте - знают где его можно купить без проблем! Различные способы фассоки Амфетамин в Ташкенте!
В каком районе можно Купить Амфетамин в Ташкенте без проблем и заморочек? Нужно Купить Амфетамин в Ташкенте Закладкой Магнит?
Целебные свойства лекарства под названием "Амфетамин в Ташкенте" по сниженной цене сейчас доступен каждому покупателю без ограничений?
Мне очень нужен Амфетамин в Ташкенте, потому что моя сестра заболела и не может принимать лекарства без Амфетамин в Ташкенте.
Все кто способен Купить Амфетамин в Ташкенте закладками прикопами или магнитами могут это сделать моментально через круглосуточный магазин Ташкент.
.
.
.
ТАШКЕНТ - УЗБЕКИСТАН - АМФЕТАМИН - ЗАКЛАДКИ- ДОСТАВКА- ГАРАНТИИ - КУПИТЬ - КРУГЛОСУТОЧНО - ЛЮБОЙ РАЙОН - УЗБЕКИСТАН
.
.
.
Конец тегов.
Накрутка просмотров instagram
(SSPEEMS, 20. 10. 2023 1:02)
Накрутка подписчиков в Instagram
https://icq.im/SMM.Shop/ru/
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 19 | 20 | 21 | 22 | 23 | 24 | 25 | 26 | 27 | 28 | 29 | 30 | 31 | 32 | 33 | 34 | 35 | 36 | 37 | 38 | 39 | 40 | 41 | 42 | 43 | 44 | 45 | 46 | 47 | 48 | 49 | 50 | 51 | 52 | 53 | 54 | 55 | 56 | 57 | 58 | 59 | 60 | 61 | 62 | 63 | 64 | 65 | 66 | 67 | 68 | 69 | 70 | 71 | 72 | 73 | 74 | 75 | 76 | 77 | 78 | 79 | 80 | 81 | 82 | 83 | 84 | 85 | 86 | 87 | 88 | 89 | 90 | 91 | 92
Поставки лантаноидов и хим. соединений с ними.
(Rebeccadrene, 6. 11. 2023 9:16)