I. Genetické minimum - chromozómové choroby a ich diagnostika
Ďurovčíková Darina
Klinika lekárskej genetiky SZU a FNsP, Bratislava
Úvod
Genetické choroby vznikajú v dôsledku mutácii na úrovni génu, alebo väčšej časti genómu, v interakcii s exogénnymi faktormi. Výskyt geneticky podmienených patologických stavov ( tab.1), alebo predispozícia k nim sa podľa viacerých štatistík odhaduje na 12-15% (1,2).
Etiologickú rôznorodosť spôsobujú rôzne typy genetických defektov, detekcia ktorých si vyžaduje špecifické laboratórne metódy (tab.1). V ostatnom čase sme zaznamenali ich významný pokrok, týkajúci sa najmä rozvoja genetických diagnostických testov, ktoré majú priamy dopad na manažment komplexnej starostlivosti o pacientov a rizikových členov rodiny. Pre včasnú diagnostiku a prevenciu genetických ochorení je dôležité vzdelávanie a transfer poznatkov do praxe každého lekára. Potrebe začlenenia najnovších poznatkov z medicínskeho výskumu a genetiky do pregraduálneho a postgraduálneho vzdelávania sú venované osobitné príspevky na blížiacej sa konferencii AMEE (Association of Medical Education in Europe). Forsíruje sa dostupnosť vedomostí s cieľom rozpoznať genotypo-fenotypové korelácie najmä vo vzťahu k liečbe a celkovej zdravotnej starostlivosti (3). Iné asociácie a spoločnosti (ESHG, OECD) odporúčajú vzdelávanie v uvedených oblastiach vrátane genomiky a proteomiky zaradiť aj do mimoprofesného vzdelávania pracovníkov v zdravotníctve ako aj pre širokú laickú verejnosť. Primeraná úroveň vzdelania zbavuje neopodstatnených obáv z genetiky, ktorá je v 21.storočí neoddeliteľnou súčasťou liečebno-preventívnej starostlivosti.
S potešením možno konštatovať, že uvedené odporúčania u nás viac rokov akceptujeme. Otázky genetického testovania, algoritmy genetickej diagnostiky, správnej laboratórnej praxe, etiky a legislatívy v odbore sú náplňou pravidelných školiacich aktivít na SZU.
Zároveň sú pre nás ambíciou zaplniť priestor v tomto periodiku na pokračovanie, ktorého obsahom bude minimum genetických poznatkov. Prvú časť venujeme chromozómovým ochoreniam a prehľadu ich diagnostických metód.
I. Chromozómové choroby
Chromozómové anomálie pozorujeme ako zmeny na chromozómoch , ktoré môžu byť :
- vrodené (konštitučné)
- získané (v priebehu života napr. malígnym procesom v bunke).
Vrodené chromozómové anomálie spôsobujú zmenou počtu, alebo štruktúry chromozómov génovú nerovnováhu a upozornia na seba závažnou poruchou morfogenézy. Pre autozómové anomálie je typický výskyt VVCH spolu s mentálnou retardáciou (obr.1). Anomálie pohlavných chromozómov sprevádzajú poruchy rastu a somatosexuálneho vývinu a sú z klinického hľadiska menej závažné. Vyhľadávanie ich zvýšeného rizika sa uskutočňuje celoplošným prenatálnym biochemický skríningom ( sAFP a betaHCG ) u tehotných žien v rozmedzí 16-18 týždňa gravidity. Vrodené a získané chromozómové anomálie potvrdíme cytogenetickým vyšetrením pri ktorom sa stanoví karyotyp. Výskyt chromozómových chýb v populácii živorodených je cca 1% (2.4).
Diagnostické známky na klinickej úrovni
Na chromozómové ochorenia u novorodenca upozorňuje prítomnosť vrodených vývinových chýb (VVCH) , ktoré sú zastúpené v ich etiológii cca 5%. Signálmi pre chromozómovú anomáliu bývajú nevysvetliteľná polystigmatizácia, tonusové poruchy, rôzne patologické parametre zistené prenatálnym ultrazvukovým vyšetrením plodu ako sú: mikrocefalia, zhrubnutá nuchálna riasa, rastová retardácia a rôzne orgánové anomálie a iné. Neskôr to býva mentálna retardácia, zaostávanie rastu, pubertálneho vývinu, nástupu menštruácie a iné. V dospelosti sa konštitučná chromozómová anomália diagnostikuje skôr výnimočne. Ich záchyt pozorujeme pri vyšetrení párov pre poruchy fertility a reprodukcie v podobe anomálií pohlavných chromozómov, zriedkavých foriem malých gonozómových mozaík a vyvážených chromozómových prestávb.
Charakteristika a rozdelenie
Predstavujú odchylky od normálnej chromozómovej výbavy somatickej bunky, ktorá obsahuje 22 párov autozómov (1-22 ) a pár pohlavných chromozómov – gonozómov (XX, alebo XY). Najčastejšou príčinou vzniku aneuploidie je nondisjukcia, alebo patologické rozdelenie chromozómov v meióze, ktoré vzniká prezygoticky. Zriedkavo sú dôsledkom postzygotickej poruchy mitotického bunkového delenia. Tieto javy sú väčšinou náhodné, aj keď sa pripúšťa, že určité rodiny môžu mať sklon k nondisjuncii (asynchrónne delenie pri predčasnom delení centroméry). Len istá malá časť chromozómových anomáli vzniká zákonite v dôsledku vyvážených anomálií (prestavieb chromozómov), ktoré sa vyskytujú v populácii ich zdravých prenášačov s frekvenciou menej ako 0,2% (4)
Rozdelenie podľa (I a II) zohľadňuje typy chromozómov a konkrétne zmeny.
I. Rozdelenie podľa typu chromozómov
A./ AUTOZÓMOVÉ
B./ GONOZÓMOVÉ
II. Podľa typu zmien v počte a štruktúre chromozómov:
a/ numerické - odchýlky od normálneho počtu diploidnej sady chromozómov somatickej bunky. Môže ísť nadpočetný chromozóm z páru ( trizómia ), chýbajúci ( monozómia ), dva nadpočetné chromozómy z páru ( tetrazómia ) , násobky sady chromozómov ( triploidie ) a iné odchylky od normálneho počtu (aneuploidie ). Z autozómových anomálií k nim patrí trizómia 21 - Downov syndróm. Ide o najčastejšiu chromozómovú anomáliu, ktorej výskyt populácii je od od 1:750-1000 živorodených. Medzi ďaľšie zvyčajne neonatálne letálne trizómie patria Patauov ( trizómia 13 ) a Edwardsov ( trizómia 18 ) syndróm.
Trizómia môže byť voľná, náhodná forma s nízkym rizikom rekurencie, alebo translokačná. Táto mohla vzniknúť ako mutácia de novo, alebo dôsledkom vyváženej translokácie jedného z rodičov. Z gonozómových anomálií má najčastejší výskyt monozómia X, alebo Turnerov ( karyotyp 45,X0 ) a Klinefelterov syndróm ( karyotyp 47,XXY), ktoré sa zisťujú v čistej, alebo mozaikovej forme. Výskyt vybraných chromozómových anomálií je v tabuľke č.2.
b/ štruktúrové - charakterizuje zmena štruktúry chromozómu vizualizovateľné ako prestavby krátkeho (p) a / alebo dlhého ramienka (q) chromozómu. Patria sem chýbanie určitého úseku chromozómu (delécia), alebo zmnoženie (duplikácia) istého úseku chromozómu. Ďalej sú to premiestnenie časti chromozómu na iný (translokácia), alebo iné tvarové zmeny chromozómov ( prstencový chromozóm, izochromozóm). Príkladom autozómovej štruktúrovej anomálie je syndróm mačacieho plaču (Cri-de-Chat sy ), ktorý spôsobuje delécia úseku krátkeho ramienka chromozómu č.5 (obr.2) Zjednodušený zápis karyotypu u chlapca s týmto syndrómom je 46,XY, 5p-. Z gonozómových anomálií sa pomerne často vyskytuje prstencový chromozóm X - karyotyp 45,X r(X), alebo izochromozóm, ktorý sa u ženy manifestuje ako Turnerov syndróm (5). Submikroskopické zmeny, kryptické translokácie nie sú možné touto metódou obsiahnúť.
c/ mozaiky: predstavujú prítomnosť viacerých bunkových klonov s rozdielnou chromozómovou výbavou. Pozorujeme ich v bunkách ako rôzne chromozómové línie, nezriedka ako minoritné, s frekvenciou menšou ako 10%. Na ich detekciu je potrebné zhodnotiť väčšie množstvo mitotických figúr. Časté sú napríklad mozaikové formy Turnerovho syndrómu, Klinefelterovho syndrómu. U týchto pacientov teda nájdeme v bunkách karyotyp s normálnym a patologickým chromozómovým nálezom. Zápis karyotypu obsahuje viacero línii a začína sa zvyčajne najpočetnejšie zastúpenou. Mozaika Turnerovho syndrómu môže mať aj takýto nezvyčajný karyotyp ( 45,XO/46,XX/46,XY ). V tomto prípade prevažuje línia s chýbajúcim X chromozóm, prítomná je aj normálna a minoritná s prítomnosťou Y chromozómu. Existujú aj iné varianty s prstencovým, alebo s izochromozómom.
Genetické diagnostické testy
Chromozómové anomálie najčastejšie diagnostikujeme laboratórnymi technikami, ktoré poskytujú kompletnú analýzu karyotypu. V ostatnom čase sa klasické metódy identifikácie chromozómov dopĺňajú o nové zobrazovacie metódy, ktorými sa odhaľujú predtým nepoznané prestavby na submikroskopickej úrovni (5,6).
Klasická metóda cytogenetického vyšetrenia je založená na analýze metafázových chromozómov získaných mitotickým delením kultivovaných lymfocytoch, ktoré sa farbia konvenčne a prúžkovacími metódami (C, G, R, Q). Detekuje numerické a štruktúrové anomálie na úrovni do 550 bandov. Vyššiu rozlišovaciu schopnosť dosiahneme metódou HRT (High resolution method), kde sa hodnotia dlhšie prometafázické chromozómy. Vyšetrenie karyotypu touto metódou vyžaduje odbornú skúsenosť a pre jej náročnosť ju nahrádzajú iné modernejšie metódy farebnej cytogenetiky (6).
Klasická cytogenetika sa rutinne využíva v diagnostike konštitučných chromozómových anomálií u pacientov s vrodenými vývinovými chybami (VVCH), mentálnou retardáciou ( MR ), poruchami rastu a pohlavného vývinu, alebo pri opakovaných spontánnych potratov. V neposlednej rade aj v prenatálnej diagnostike u plodu, ktorá sa uskutočňuje po stanovení ich rizika klinickým genetikom. Gonozómové anomálie, najmä v nizkopercentnej mozaikovej forme (Turnerov, Klinefelterov syndróm) sa môžu výnimočne diagnostikovať až pri poruchách reprodukcie v dospelom veku. Klasická metóda umožní záchyt štruktúrových anomálií a mnohonásobných chromozómových prestávb, ktoré sú typické pre syndrómy chromozómovej instability s rizikom malignity. Príkladom sú Fanconiho anémia, Ataxia teleangiektázia, Nijmegenský syndróm a iné. Manifestujú sa zvýšenou lomivosťou chromozómov. Najčastejšie sa pri týchto syndrómov zistí instabilná chromozómová translokácia 7/14, spolu s inými štruktúrovými zmenami a figúrami ( gapy, breaky, triradiály, kvadruradiály), ktoré bývajú v rôznom percentuálnom zastúpení (obr.3).
Fluorescenčná in situ hybridizácia ( FISH ) metóda používa metódy molekulovej cytogenetiky. Umožní diagnostiku chromozómových prestávb na submikroskopickej úrovni ( < 800 bandov ), ktoré nie sú vizualizovateľné klasickou technikou . Ide najmä o mikrodelečné a mikroduplikačné syndrómy a pomáha tiež odhaliť nízkopercentné mozaiky. Princípom je detekcia signálov po hybridizácii pacientovej chromozómovej DNA so špecifickými sondami (centromerickými, celochromozómovým, alebo lokusovo špecifickými) použitými podľa potreby (obr.4 ). Centromerické sondy sa používajú na zisťovanie numerických chromozómových chýb s dôkazom prítomnosti centromér, telomerických sekvencií a obsahu heterochromatínu. Celochromozómové sondy hybridizujú so svojim homológom pozdĺž celého chromozómu. Sú vhodné na diagnostiku štruktúrových anomálií chromozómov ako sú translokácie, delécie, inverzie. Lokusovo špecifické, alebo génové sondy hybridizujú do oblasti hľadaných konkrétnych sekvencii. Tento typ sond, veľkosti cca 150 kb, sa využíva k diagnostike mikrodelečných syndrómov ako sú napríklad najznámejšie z nich ( Praderov-Williho, Angelmanov, Di-Georgov, Wiliamsov-Beuerenov). Výhodou tejto metódy je hodnotenie signálov na väčšom počte chromozómov aj bunkových jadier. Použitie FISH a iných DNA metód detekujúcich sekvencie v oblasti SRY chromozómu Y umožňuje pri mozaikových formách Turnerovho syndrómu vyhľadávať pacientky s rizikom gonadoblastómu.
Kombinácia klasických a molekulovo cytogenetických metód sa využíva v onkogenetike pri diagnostike a liečbe hemoblastóz, vrátane monitorovania reziduálnej choroby a postransplantačných stavoch. Chronickú myeloickú leukémiu potvrdzuje výskyt chromozómu Philadelphia, ktorý vzniká v dôsledku translokácie medzi dlhými ramenami
Iné modifikované techniky
CGH - Komparatívna genómová hybridizácia je založená na porovnávaní dvoch fluorescenčne značených vzoriek DNA ( referenčnej a pacientovej), ktoré hybridizujú s normálnymi metafázovými chromozómami. Pacientová testovaná DNA je značená zeleným flurochrómom a referenčná vzorka ( DNA od zdravého jedinca s normálnym karyotypom ) sa označuje červeným. V pomere 1:1 sa obidve nechajú hybridizovať na preparáte s normálnymi chromozómami. Nerovnováhu v testovanej vzorke zistíme vyhodnotením pomeru intenzity zelenej a červenej fluorescencie pomocou špeciálneho softwaru. Využíva sa v nádorovej cytogenetike na skrínovanie chromozómovej nerovnováhy. Metóda však presnejšiu identifikáciu prestavby neumožňuje.
Multicolor FISH- mnohonásobná farebná fluorescentná in situ hybridizácia K detekcii zmien sa používa zmes rozdielne značených sond 5 fluorochrómami a ich vzájomnou kombináciou, čím sa docieli rozlíšenie všetkých chromozómov. Na vyhodnotenie je potrebná digitálna zobrazovacia mikroskopia s filtrami, CCD kamera a počítačový software k analýze obrazu. Na základe fluorochrómovej kompozície sa každému chromozómu určí tzv.pseudofarba..Táto metóda sa používa na identifikáciu zložitejších translokácií a prestavieb medzi viacerými chromozómami. Neumožňuje detekciu vnútrochromozómových zmien typu inverzií a malých delécií.
SKY - spektrálne karyotypovanie je variantom mnohofarebnej FISH, každému chromozómu je tiež pridelená pseudofarba. Kombinuje snímanie obrazu trojakým filtrom CCD kamerou s Fourierovou spektroskopiou a príslušným počítačovým programom.
mBAND - metóda mnohonásobného pruhovania - je založená na podobnom princípe ako FISH. Podstatou m.-pruhovania je označenie jedného chromozómu viacerými značenými sondami. V kombinácii sa tiež používa 5 fluorochrómov. Každá sonda hybridizuje s inou časťou chromozómu. Na základe hybridizačných signálov dochádza k tvorbe priečnych farebných pruhov po celej dĺžke chromozómu.
Záver: Zlatým štandardom klinickej cytogenetiky je vyšetrenie karyotypu klasickou metódou. S pribúdajúcimi dôkazmi o výskyte submikroskopických chromozómových zmien, kryptických prestávb modernými laboratórnymi technikami sa zvyšuje pravdepodobnosť odhaliť kauzálnu súvislosť s etiologicky neobjasnenou mentálnou retardáciou a polystigmatizáciou.
Literatúra:
1. Smith, C. J., Donnai , D.: Human malformation. In: Emery and Rimon´s Principles and Practice of Medical Genetics. 3.vyd. New-York: Churchill Livingstone, 1998, s. 687 - 696.
2. Thompson and Thompsonová : Genetics in medicine, W.B.Saunders company, 6-th Ed., 2001, s.443.
3. Internetové adresy: www.amee.org
4. VOGEL, F., MOTULSKY, A.G. Human Genetics. 3. vyd .Berlin-Heidelberg: Springer - Verlag , 1997, s 370 -376 .
5. Izakovič V. a kolektív: Cytogenetika v klinickej endokrinológii., Osveta Martin, 1972, 320 s.
6. Černáková I., Ďurovčíková D., Brozmanová, M.: De novo tandem duplication 15q21-26 identified by FISH. Cytogenet.Cell. Genet.,Vol.85,1999, Suppl.1., s.144
Tab.1 Geneticky podmienené patologické stavy
Chromozómové ( 0,6 – 0,9 %)
Monogénové ( 0,8% )
AD, AR, X-viazané
Multifaktoriálne ( polygénne dedičné)
a/ izolované VVCH ( 3-5% )
b/ choroby dospelého veku ( 5% )
Genetické poruchy somatických buniek
Mitochondriálne dedičné
____________________________________________
Celkový výskyt v populácii živorodených : 12 -15%
Tab. 2 Populačná frekvencia chromozómových syndrómov
( na 1000 živorodených )
Trizómia 21 (Downov ) |
1,5 |
Trizómia 18 (Edwardsov ) |
0,12 |
Trizómia 13 (Patauov) |
0,07 |
47,XXY (Klinefelterov) |
1,5 |
45,X (Turnerov ) |
0,4 |
XYY sy |
1,5 |
XXX sy |
0,65 |
Komentáře
Přehled komentářů
Hello dear friend, I would like to offer placement of your link (or links) on different platforms of the internet such as: forums, blogs, comments and much more. . .
Increase your Visibility Boost Your Seo Rank - Get Organic Traffic From Google. Ranking in Google isn’t hard. All you need is a healthy number of backlinks from referring domains that have authority and trust in Google’s eyes.
This Backlinks Service Benefits:
1. Easily get Google rankings
2. Get a lot of traffic from Google
3. You can earn from the website in different ways
4. Increase Domain Authority (DA)
Quality guaranteed !
PRICE - 20$
WebSite - https://goo.su/ZUHZ
У нас была жесткая тематика, но наш сайт пошел выше после работы парней с Bullet
(Michaelmub, 27. 2. 2024 14:59)
Привет всем!
Мой сайт стоял на месте, но данный продукт смог его раскачать
Привет всем, хочу рассказать как наша компания продвинула сайт
https://www.google.com/search?q=%D1%83%D1%81%D0%BA%D0%BE%D1%80%D0%B5%D0%BD%D0%B8%D0%B5+%D0%B8%D0%BD%D0%B4%D0%B5%D0%BA%D1%81%D0%B0%D1%86%D0%B8%D0%B8+%D1%81%D1%81%D1%8B%D0%BB%D0%BE%D0%BA+%D1%82%D0%B0%D1%80%D0%B8%D1%84+bullet+kwork&sca_esv=46579d9512b829aa&ei=AhTSZazoC_qUxc8P9MCngAI&udm=&ved=0ahUKEwis8bnOjLWEAxV6SvEDHXTgCSAQ4dUDCBA&uact=5&oq=%D1%83%D1%81%D0%BA%D0%BE%D1%80%D0%B5%D0%BD%D0%B8%D0%B5+%D0%B8%D0%BD%D0%B4%D0%B5%D0%BA%D1%81%D0%B0%D1%86%D0%B8%D0%B8+%D1%81%D1%81%D1%8B%D0%BB%D0%BE%D0%BA+%D1%82%D0%B0%D1%80%D0%B8%D1%84+bullet+kwork&gs_lp=Egxnd3Mtd2l6LXNlcnAiTNGD0YHQutC-0YDQtdC90LjQtSDQuNC90LTQtdC60YHQsNGG0LjQuCDRgdGB0YvQu9C-0Log0YLQsNGA0LjRhCBidWxsZXQga3dvcmtIri5Qog1Y3yhwCXgAkAEBmAHkAaABnBKqAQUxLjMuOLgBA8gBAPgBAYgGAQ&sclient=gws-wiz-serp
https://www.google.com/search?q=%D0%BF%D1%80%D0%BE%D0%B4%D0%B2%D0%B8%D0%B6%D0%B5%D0%BD%D0%B8%D0%B5+%D1%81%D0%B0%D0%B9%D1%82%D0%B0+%D1%82%D0%B0%D1%80%D0%B8%D1%84+bullet+kwork&sca_esv=46579d9512b829aa&ei=KBzSZc_VFPeGwPAP996t4Ao&udm=&ved=0ahUKEwjPiZqxlLWEAxV3AxAIHXdvC6wQ4dUDCBA&uact=5&oq=%D0%BF%D1%80%D0%BE%D0%B4%D0%B2%D0%B8%D0%B6%D0%B5%D0%BD%D0%B8%D0%B5+%D1%81%D0%B0%D0%B9%D1%82%D0%B0+%D1%82%D0%B0%D1%80%D0%B8%D1%84+bullet+kwork&gs_lp=Egxnd3Mtd2l6LXNlcnAiOdC_0YDQvtC00LLQuNC20LXQvdC40LUg0YHQsNC50YLQsCDRgtCw0YDQuNGEIGJ1bGxldCBrd29yazIFECEYoAFIqRxQ-QFYkhlwA3gBkAECmAHkAaABvgyqAQUwLjMuNbgBA8gBAPgBAcICChAAGEcY1gQYsAPCAgQQIRgVwgIJECEYChigARgqwgIHECEYChigAYgGAZAGCA&sclient=gws-wiz-serp
Удачи!
Неожидал что обычный прогон по ссылкам может так прокачать сайт, все в топе!
(Michaelmub, 27. 2. 2024 14:06)
Привет всем!
Всем кто в рекламе и Seo, данные варианты действительно помогают, проверено
Я начал делать сетку сайтов, все было не в поиске, но прогон Bullet помог
https://www.google.com/search?q=%D1%83%D1%81%D0%BA%D0%BE%D1%80%D0%B5%D0%BD%D0%B8%D0%B5+301+%D1%81%D1%81%D1%8B%D0%BB%D0%BE%D0%BA+%D1%82%D0%B0%D1%80%D0%B8%D1%84+bullet+kwork&sca_esv=46579d9512b829aa&ei=FBTSZa_PDJrbxc8Ppcqo0A0&udm=&ved=0ahUKEwivqYXXjLWEAxWabfEDHSUlCtoQ4dUDCBA&uact=5&oq=%D1%83%D1%81%D0%BA%D0%BE%D1%80%D0%B5%D0%BD%D0%B8%D0%B5+301+%D1%81%D1%81%D1%8B%D0%BB%D0%BE%D0%BA+%D1%82%D0%B0%D1%80%D0%B8%D1%84+bullet+kwork&gs_lp=Egxnd3Mtd2l6LXNlcnAiO9GD0YHQutC-0YDQtdC90LjQtSAzMDEg0YHRgdGL0LvQvtC6INGC0LDRgNC40YQgYnVsbGV0IGt3b3JrSKxFUOElWLgocAJ4AJABAJgB3gGgAaMGqgEFMC4yLjK4AQPIAQD4AQGIBgE&sclient=gws-wiz-serp
https://www.google.com/search?q=%D1%83%D1%81%D0%BA%D0%BE%D1%80%D0%B5%D0%BD%D0%B8%D0%B5+%D0%B8%D0%BD%D0%B4%D0%B5%D0%BA%D1%81%D0%B0%D1%86%D0%B8%D0%B8+%D1%81%D1%81%D1%8B%D0%BB%D0%BE%D0%BA+%D1%82%D0%B0%D1%80%D0%B8%D1%84+bullet+kwork&sca_esv=46579d9512b829aa&ei=AhTSZazoC_qUxc8P9MCngAI&udm=&ved=0ahUKEwis8bnOjLWEAxV6SvEDHXTgCSAQ4dUDCBA&uact=5&oq=%D1%83%D1%81%D0%BA%D0%BE%D1%80%D0%B5%D0%BD%D0%B8%D0%B5+%D0%B8%D0%BD%D0%B4%D0%B5%D0%BA%D1%81%D0%B0%D1%86%D0%B8%D0%B8+%D1%81%D1%81%D1%8B%D0%BB%D0%BE%D0%BA+%D1%82%D0%B0%D1%80%D0%B8%D1%84+bullet+kwork&gs_lp=Egxnd3Mtd2l6LXNlcnAiTNGD0YHQutC-0YDQtdC90LjQtSDQuNC90LTQtdC60YHQsNGG0LjQuCDRgdGB0YvQu9C-0Log0YLQsNGA0LjRhCBidWxsZXQga3dvcmtIri5Qog1Y3yhwCXgAkAEBmAHkAaABnBKqAQUxLjMuOLgBA8gBAPgBAYgGAQ&sclient=gws-wiz-serp
Удачи!
TriptiaClulk
(TriptiaClulk, 27. 2. 2024 12:21)
Thanks for your personal marvelous posting! I really enjoyed reading it, you might be a great author.I will make certain to bookmark your blog and definitely will come back in the future. I want to encourage you to definitely continue your great posts, have a nice weekend!
Hidden Ad Monetization Gems: Discover What Successful Publishers Are Doing Differently
(Charlesgoody, 27. 2. 2024 3:10)
Hey, I visited your site and I think that your content is amazing! It is really engaging and original, you must have worked so hard to generate such a quality content.
My name is Natasha from ForeMedia and I help website owners with great websites to maximize the revenue they make from their website.
I would love to buy Ad Spaces on your website and pay you per each impression of the ads on your site. We are Google Ad Exchange Premium partners and we work with more than 100 Ad Network & thousands of premium direct advertisers who would LOVE to buy Ads directly from your site and we can guarantee to increase your revenue by at least 45% compared to other advertising solutions you are currently using.
You deserve to earn more for your content and maximize your earning potential and I will help you unlock that potential!
There is no cost, you can register to our monetization platform for free on this link: https://foremedia-ads.net
I will be available for you on the Live Chat if you need any help, or you can email me back to: natasha@foremedia-ads.net if you have any questions.
I have at least 17 Premium Advertisers that have asked me to approach you because they would like to advertise on your website on Premium eCPM <cost>per impressions] basis.
Have a good day & feel free to ping me for any question!
Click the link here for 1 minute registration to our platform <it>s free!]: https://foremedia-ads.net
ForeMedia - Earn Money With Your Website
https://foremedia-ads.net
Huffington Post Today
(Randallprecy, 27. 2. 2024 1:45)
Read the latest headlines, news stories, and opinion from Politics, Entertainment, Life, Perspectives, and more.
https://www.huffingtonposttoday.com
Велосипеды Specialized
(RichardBaich, 26. 2. 2024 23:13)
Компания Specialized — один из ключевых производителей велосипедов и инвентаря
https://katay.com.ua/ru/velosypedy-specialized/
Dokumenty Kolekcjonerskie: Pamięć i Wartość w Świecie Kolekcji
(Chesterden, 26. 2. 2024 19:14)
W dzisiejszym zglobalizowanym społeczeństwie, gdzie cyfrowa rzeczywistość staje się coraz bardziej powszechna, dokumenty kolekcjonerskie pełnią rolę nie tylko materialnych artefaktów, ale także strażników pamięci i dziedzictwa. Co sprawia, że te papierowe, czasem wiekowe przedmioty stają się przedmiotem pożądania dla kolekcjonerów? Jak ewoluowały przez lata i jaką rolę odgrywają w dzisiejszym świecie kolekcji?
Początki dokumentów kolekcjonerskich sięgają odległej przeszłości, kiedy to zapisywano ważne wydarzenia na papierze, skórze, czy kamiennej tablicy. Służyły one jako nośniki informacji, świadectwa własności czy też potwierdzenia transakcji. Z biegiem lat, niektóre z nich stały się nie tylko dokumentami, ale i dziełami sztuki, zdobiącymi zbiory pasjonatów historii i kultury.
Jednym z najbardziej cenionych dokumentów kolekcjonerskich są stare mapy geograficzne. Przekładają się one nie tylko na wartość kartograficzną, ale również na historyczne znaczenie. Mapa świata sprzed wieków to okno w przeszłość, które pozwala nam zobaczyć, jak postrzegano świat w dawnych czasach. To jednocześnie zapis zmieniających się granic, odkryć geograficznych i ewolucji społeczeństw.
Innym przykładem dokumentów kolekcjonerskich są stare listy, manuskrypty czy dokumenty autentyczne z ważnych wydarzeń historycznych. Kolekcjonerzy często poszukują rękopisów sławnych pisarzy, które nie tylko stanowią unikatowe dzieła, ale także odsłaniają proces twórczy i myślowy ich autorów.
Wraz z rozwojem technologii, dokumenty kolekcjonerskie przeszły metamorfozę. Obecnie, obok tradycyjnych papierowych dokumentów, coraz bardziej cenione są dokumenty cyfrowe. To mogą być np. unikatowe pliki dźwiękowe, fotografie czy też elektroniczne kopie ważnych dokumentów historycznych. Choć nie posiadają one fizycznej formy, ich wartość tkwi w unikalności i trwałości informacji, które przechowują.
czytaj wiecej https://dobreplastiki.com/pl/
Sykaaa Casino Официальный Сайт: Плюсы и минусы регистрации
(ArthurPek, 26. 2. 2024 13:14)
Здравствуйте!
Sykaaa Casino, https://serpcity.ru запущенное в 2022 году, привносит в мир азартных развлечений свежий ветер. Владельцем казино является Snowdunes B.V., а лицензия, выданная в Кюрасао (8048/JAZ2022-007), обеспечивает безопасность и честность игры.
Для вывода средств из казино Sykaaa, игроку нужно авторизоваться и выбрать вкладку "Касса". Минимальная сумма для вывода – 150 RUB или 20 USD. При выводе суммы более 200 USD требуется верификация аккаунта.
Казино предоставляет разнообразные варианты платежных систем, включая карты, электронные кошельки и криптовалюты.
Минимальный депозит в Sykaaa Casino – 5 USD, а максимальный – 60000 USD. Геймеры могут регулировать лимиты на депозит по мере продвижения по уровням программы
лояльности. Казино также предоставляет возможность бесплатной игры в демо-режиме для ознакомления с играми и правилами.
Sykaaa Casino радует игроков оригинальными бонусами. Новички могут получить 100 фриспинов на Razor Shark без депозита.
Приветственный бонус в размере 100% от первого депозита с условием вейджера х45. Казино также организует турниры и акцию "Игра дня".
Для решения вопросов у игроков круглосуточно работает служба технической поддержки. Связаться можно через live chat, отправив письмо или позвонив по указанному номеру
телефона. Официальный сайт казино Sykaaa может быть периодически заблокирован провайдерами. В таких случаях игроки могут использовать зеркала или специальные программы для обхода блокировок. Регистрация открыта для игроков из Европы, России, Украины и Беларуси.
сайт сукааа
скачать сукааа
игровые автоматы sykaa sykaaaa online
sykaaa казино онлайн регистрация
сайт sykaaa
sykaaa зеркало рабочее
sykaa слоты
sykaaa casino sykaaaa online
Удачи и прибыли Друзья!
Sykaaa Casino Бонус Бездепозитный: Как начать игру без вложений
(ArthurPek, 26. 2. 2024 12:24)
Доброго!
В 2022 году в мире азартных развлечений появился новый игрок https://serpcity.ru — казино Sykaaa. За его разработку и эксплуатацию отвечает Snowdunes B.V.
Сайт оперирует под лицензией Curacao: 8048/JAZ2022-007, выданной владельцу платформы. Этот молодой проект, основанный в 2022 году, уже успел привлечь внимание игроков своими бонусами и богатым выбором игр. Для обеспечения надежности, оператор получил лицензию от Кюрасао.
Валидность лицензии можно проверить на главной странице, кликнув по соответствующей иконке валидатора. Владельцем платформы является Snowdunes B.V., а сам проект находится в стадии активного развития.
Sykaaa Casino стремится охватить широкую аудиторию, предоставив интерфейс на трех языках: русском, украинском и английском.
Такое многоязычие делает сайт доступным для игроков из разных стран. Оригинальные бонусы и акции делают игру в Sykaaa Casino увлекательной.
Например, новичкам доступны 100 бесплатных вращений для автомата Razor Shark в течение 7 дней после регистрации. Приветственный бонус составляет 100%,
а максимальная сумма, которую можно получить, — 5000 евро. Свыше 1000 игр от таких провайдеров, как Betsoft, Pragmatic Play, Microgaming и другие,
доступны пользователям Sykaaa Casino. Каталог постоянно расширяется, делая игровой процесс разнообразным и интересным.
Sykaaa Casino предлагает разнообразные способы пополнения и вывода средств, включая Мир, СБП, Visa, Mastercard, Bitcoin и другие.
Минимальный депозит для активации бонуса — 500 рублей, а лимит на вывод составляет 10 000 USD в день. Sykaaa Casino не предлагает отдельного приложения, но мобильная версия сайта обеспечивает стабильную работу на любых устройствах. Благодаря этому, игроки могут наслаждаться азартом через браузер смартфона или планшета.
syyka казино
сукааа казино играть
сукаа казино официальный сайт
sykaaa казино зеркало
sukaaa казино
sykaaa casino играть
sykaaa casino рабочее зеркало
sykaaa казино рабочее зеркало на сегодня
Удачи и прибыли Друзья!
Верите ему - Отзыв - Астарт Вард отзывы форум
(JoshuaMax, 26. 2. 2024 2:04)
Астарт Вард отзывы форум magastartvard . ru Астарт Вард отзывы форум
______________________________________________________
Не так давно обращалась к magastartvard . ru - отзывы только хорошие
Обратилась к магу Астарту Варду с просьбой о защите от негативных воздействий. Его защитный ритуал оказался эффективным - я чувствую себя более спокойной и уверенной в себе. Благодарю за вашу помощь!
______________________________________________________________
Астарт Вард отзывы форум
Обращался - Отзыв magpomosh ru - magpa666 @ bk ru как найти настоящего мага а не шарлатана
(Jamesdow, 25. 2. 2024 6:39)
Крастко - Отзывы magpomosh ru - сайт - приворот на вуду отзыв
Как я обратилась на сайт magpomosh .ru - отзывы клиентов - магия работает!
Заказала у мага Александры ритуал на улучшение отношений с семьей. Ее магическая работа помогла разрешить конфликты и создать гармонию в доме. Очень благодарна за это!
_________________________________________________________
Сайт ищут по тегам:
где найти честного мага проверенного подскажу проверенного мага подскажите настоящего мага
настоящий маг проверенный только проверенные маги и колдуны черные маги оплата по результату проверенные в москве
настоящего мага воды форум проверенные маги лучшие проверенные маги
есть настоящие маги проверенных магов маги и колдуны проверенные
Обращение к magastartvard . ru - отзыв - отзывы о маге Астарт Вард
(Josephketle, 24. 2. 2024 23:07)
маг Астарт Вард отзывы magastartvard . ru отзывы о маге Астарт Вард
______________________________________________________
Не так давно обращалась к magastartvard . ru - отзывы только хорошие
Обратилась к магу Астарту Варду с просьбой о защите от негативных воздействий. Его защитный ритуал оказался эффективным - я чувствую себя более спокойной и уверенной в себе. Благодарю за вашу помощь!
______________________________________________________________
маг Астарт Вард отзывы
Watch Dogs Legion
(Berniceduh, 24. 2. 2024 4:50)
Watch Dogs Legion
https://инфогамес.рф/2024/02/12/watch-dogs-legion-save/
captcha service
(ElijahSet, 24. 2. 2024 2:13)
It's fantastic that you are getting thoughts from this paragraph as well as from our dialogue made here.
look also at my pages and give a rating
XEvil is a straightforward, quickly and effortless system for fully automated recognition and bypass with the vast majority of captchas (CAPTCHAs), without the want to attach any 3rd-social gathering products and services.
The program almost fully replaces services like AntiGate (Anti-Captcha), RuCaptcha, DeCaptcher and others. Concurrently, it considerably exceeds them in recognition pace (10 situations or more) and is completely free.
https://tourdeskhawaii.com/golf/bbs/board.php?bo_table=free&wr_id=1118878 speed index how to fix
https://davisv8513596.discussblog.com/the-most-overlooked-fact-about-speedyindex-google-revealed/ speedyindex google sheets
@d@=
Отзывы svetlanamag ru - отзывы svetlanamagg @ yandex список магов проверенных
(MatthewHix, 23. 2. 2024 18:26)
svetlanamag ru - svetlanamagg @ yandex ru
Заказала ритуал приворота у мага Светланы, чтобы привлечь внимание парня, в которого я была влюблена. Результат был просто потрясающим - он начал обращать на меня внимание и стал часто проводить со мной время.
-где найти в москве настоящего мага
-приворот настоящий маги
-маг настоящий помогу
-как стать магам по настоящему
BITCOIN LOTTERY - SOFTWARE FREE
(LamaCliex, 23. 2. 2024 6:21)
I want to show you one exclusive program called (BTC PROFIT SEARCH AND MINING PHRASES), which can make you a rich man!
This program searches for Bitcoin wallets with a balance, and tries to find a secret phrase for them to get full access to the lost wallet!
Run the program and wait, and in order to increase your chances, install the program on all computers available to you, at work, with your friends, with your relatives, you can also ask your classmates to use the program, so your chances will increase tenfold!
Remember the more computers you use, the higher your chances of getting the treasure!
DOWNLOAD FOR FREE
Telegram:
https://t.me/btc_profit_search
Надежные промокоды Эльдорадо на сегодня
(JamesMat, 23. 2. 2024 2:02)
Здравствуйте!
Промокоды для интернет-магазина Эльдорадо – это уникальные коды, которые можно использовать при оформлении заказа на официальном веб-сайте компании.
Они предоставляют дополнительные преимущества клиентам в виде скидок на определенные товары или услуги, бесплатной доставки и других бонусов.
Как найти такие промокоды для Эльдорадо? Обычно они предоставляются в рамках специальных акций компании, которые могут быть организованы
на ее официальном веб-сайте, в социальных сетях или на специализированных ресурсах, например, на сайте free-promocode.ru,
который предлагает самые свежие и проверенные промокоды
Сайт самых свежих и проверенных промокодов магазина Эльдорадо https://free-promocode.ru
Удачных покупок!
рабочие промокоды Эльдорадо
Официальные акции Эльдорадо
Специальные предложения и скидки Эльдорадо
Эксклюзивные промо-коды Эльдорадо
Эксклюзивные акции и скидки в Эльдорадо
Удачи!
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 19 | 20 | 21 | 22 | 23 | 24 | 25 | 26 | 27 | 28 | 29 | 30 | 31 | 32 | 33 | 34 | 35 | 36 | 37 | 38 | 39 | 40 | 41 | 42 | 43 | 44 | 45 | 46 | 47 | 48 | 49 | 50 | 51 | 52 | 53 | 54 | 55 | 56 | 57 | 58 | 59 | 60 | 61 | 62 | 63 | 64 | 65 | 66 | 67 | 68 | 69 | 70 | 71 | 72 | 73 | 74 | 75 | 76 | 77 | 78 | 79 | 80 | 81 | 82 | 83 | 84 | 85 | 86 | 87 | 88 | 89 | 90 | 91 | 92
https://goo.su/ZUHZ
(JamesTuh, 27. 2. 2024 16:38)