I. Genetické minimum - chromozómové choroby a ich diagnostika
Ďurovčíková Darina
Klinika lekárskej genetiky SZU a FNsP, Bratislava
Úvod
Genetické choroby vznikajú v dôsledku mutácii na úrovni génu, alebo väčšej časti genómu, v interakcii s exogénnymi faktormi. Výskyt geneticky podmienených patologických stavov ( tab.1), alebo predispozícia k nim sa podľa viacerých štatistík odhaduje na 12-15% (1,2).
Etiologickú rôznorodosť spôsobujú rôzne typy genetických defektov, detekcia ktorých si vyžaduje špecifické laboratórne metódy (tab.1). V ostatnom čase sme zaznamenali ich významný pokrok, týkajúci sa najmä rozvoja genetických diagnostických testov, ktoré majú priamy dopad na manažment komplexnej starostlivosti o pacientov a rizikových členov rodiny. Pre včasnú diagnostiku a prevenciu genetických ochorení je dôležité vzdelávanie a transfer poznatkov do praxe každého lekára. Potrebe začlenenia najnovších poznatkov z medicínskeho výskumu a genetiky do pregraduálneho a postgraduálneho vzdelávania sú venované osobitné príspevky na blížiacej sa konferencii AMEE (Association of Medical Education in Europe). Forsíruje sa dostupnosť vedomostí s cieľom rozpoznať genotypo-fenotypové korelácie najmä vo vzťahu k liečbe a celkovej zdravotnej starostlivosti (3). Iné asociácie a spoločnosti (ESHG, OECD) odporúčajú vzdelávanie v uvedených oblastiach vrátane genomiky a proteomiky zaradiť aj do mimoprofesného vzdelávania pracovníkov v zdravotníctve ako aj pre širokú laickú verejnosť. Primeraná úroveň vzdelania zbavuje neopodstatnených obáv z genetiky, ktorá je v 21.storočí neoddeliteľnou súčasťou liečebno-preventívnej starostlivosti.
S potešením možno konštatovať, že uvedené odporúčania u nás viac rokov akceptujeme. Otázky genetického testovania, algoritmy genetickej diagnostiky, správnej laboratórnej praxe, etiky a legislatívy v odbore sú náplňou pravidelných školiacich aktivít na SZU.
Zároveň sú pre nás ambíciou zaplniť priestor v tomto periodiku na pokračovanie, ktorého obsahom bude minimum genetických poznatkov. Prvú časť venujeme chromozómovým ochoreniam a prehľadu ich diagnostických metód.
I. Chromozómové choroby
Chromozómové anomálie pozorujeme ako zmeny na chromozómoch , ktoré môžu byť :
- vrodené (konštitučné)
- získané (v priebehu života napr. malígnym procesom v bunke).
Vrodené chromozómové anomálie spôsobujú zmenou počtu, alebo štruktúry chromozómov génovú nerovnováhu a upozornia na seba závažnou poruchou morfogenézy. Pre autozómové anomálie je typický výskyt VVCH spolu s mentálnou retardáciou (obr.1). Anomálie pohlavných chromozómov sprevádzajú poruchy rastu a somatosexuálneho vývinu a sú z klinického hľadiska menej závažné. Vyhľadávanie ich zvýšeného rizika sa uskutočňuje celoplošným prenatálnym biochemický skríningom ( sAFP a betaHCG ) u tehotných žien v rozmedzí 16-18 týždňa gravidity. Vrodené a získané chromozómové anomálie potvrdíme cytogenetickým vyšetrením pri ktorom sa stanoví karyotyp. Výskyt chromozómových chýb v populácii živorodených je cca 1% (2.4).
Diagnostické známky na klinickej úrovni
Na chromozómové ochorenia u novorodenca upozorňuje prítomnosť vrodených vývinových chýb (VVCH) , ktoré sú zastúpené v ich etiológii cca 5%. Signálmi pre chromozómovú anomáliu bývajú nevysvetliteľná polystigmatizácia, tonusové poruchy, rôzne patologické parametre zistené prenatálnym ultrazvukovým vyšetrením plodu ako sú: mikrocefalia, zhrubnutá nuchálna riasa, rastová retardácia a rôzne orgánové anomálie a iné. Neskôr to býva mentálna retardácia, zaostávanie rastu, pubertálneho vývinu, nástupu menštruácie a iné. V dospelosti sa konštitučná chromozómová anomália diagnostikuje skôr výnimočne. Ich záchyt pozorujeme pri vyšetrení párov pre poruchy fertility a reprodukcie v podobe anomálií pohlavných chromozómov, zriedkavých foriem malých gonozómových mozaík a vyvážených chromozómových prestávb.
Charakteristika a rozdelenie
Predstavujú odchylky od normálnej chromozómovej výbavy somatickej bunky, ktorá obsahuje 22 párov autozómov (1-22 ) a pár pohlavných chromozómov – gonozómov (XX, alebo XY). Najčastejšou príčinou vzniku aneuploidie je nondisjukcia, alebo patologické rozdelenie chromozómov v meióze, ktoré vzniká prezygoticky. Zriedkavo sú dôsledkom postzygotickej poruchy mitotického bunkového delenia. Tieto javy sú väčšinou náhodné, aj keď sa pripúšťa, že určité rodiny môžu mať sklon k nondisjuncii (asynchrónne delenie pri predčasnom delení centroméry). Len istá malá časť chromozómových anomáli vzniká zákonite v dôsledku vyvážených anomálií (prestavieb chromozómov), ktoré sa vyskytujú v populácii ich zdravých prenášačov s frekvenciou menej ako 0,2% (4)
Rozdelenie podľa (I a II) zohľadňuje typy chromozómov a konkrétne zmeny.
I. Rozdelenie podľa typu chromozómov
A./ AUTOZÓMOVÉ
B./ GONOZÓMOVÉ
II. Podľa typu zmien v počte a štruktúre chromozómov:
a/ numerické - odchýlky od normálneho počtu diploidnej sady chromozómov somatickej bunky. Môže ísť nadpočetný chromozóm z páru ( trizómia ), chýbajúci ( monozómia ), dva nadpočetné chromozómy z páru ( tetrazómia ) , násobky sady chromozómov ( triploidie ) a iné odchylky od normálneho počtu (aneuploidie ). Z autozómových anomálií k nim patrí trizómia 21 - Downov syndróm. Ide o najčastejšiu chromozómovú anomáliu, ktorej výskyt populácii je od od 1:750-1000 živorodených. Medzi ďaľšie zvyčajne neonatálne letálne trizómie patria Patauov ( trizómia 13 ) a Edwardsov ( trizómia 18 ) syndróm.
Trizómia môže byť voľná, náhodná forma s nízkym rizikom rekurencie, alebo translokačná. Táto mohla vzniknúť ako mutácia de novo, alebo dôsledkom vyváženej translokácie jedného z rodičov. Z gonozómových anomálií má najčastejší výskyt monozómia X, alebo Turnerov ( karyotyp 45,X0 ) a Klinefelterov syndróm ( karyotyp 47,XXY), ktoré sa zisťujú v čistej, alebo mozaikovej forme. Výskyt vybraných chromozómových anomálií je v tabuľke č.2.
b/ štruktúrové - charakterizuje zmena štruktúry chromozómu vizualizovateľné ako prestavby krátkeho (p) a / alebo dlhého ramienka (q) chromozómu. Patria sem chýbanie určitého úseku chromozómu (delécia), alebo zmnoženie (duplikácia) istého úseku chromozómu. Ďalej sú to premiestnenie časti chromozómu na iný (translokácia), alebo iné tvarové zmeny chromozómov ( prstencový chromozóm, izochromozóm). Príkladom autozómovej štruktúrovej anomálie je syndróm mačacieho plaču (Cri-de-Chat sy ), ktorý spôsobuje delécia úseku krátkeho ramienka chromozómu č.5 (obr.2) Zjednodušený zápis karyotypu u chlapca s týmto syndrómom je 46,XY, 5p-. Z gonozómových anomálií sa pomerne často vyskytuje prstencový chromozóm X - karyotyp 45,X r(X), alebo izochromozóm, ktorý sa u ženy manifestuje ako Turnerov syndróm (5). Submikroskopické zmeny, kryptické translokácie nie sú možné touto metódou obsiahnúť.
c/ mozaiky: predstavujú prítomnosť viacerých bunkových klonov s rozdielnou chromozómovou výbavou. Pozorujeme ich v bunkách ako rôzne chromozómové línie, nezriedka ako minoritné, s frekvenciou menšou ako 10%. Na ich detekciu je potrebné zhodnotiť väčšie množstvo mitotických figúr. Časté sú napríklad mozaikové formy Turnerovho syndrómu, Klinefelterovho syndrómu. U týchto pacientov teda nájdeme v bunkách karyotyp s normálnym a patologickým chromozómovým nálezom. Zápis karyotypu obsahuje viacero línii a začína sa zvyčajne najpočetnejšie zastúpenou. Mozaika Turnerovho syndrómu môže mať aj takýto nezvyčajný karyotyp ( 45,XO/46,XX/46,XY ). V tomto prípade prevažuje línia s chýbajúcim X chromozóm, prítomná je aj normálna a minoritná s prítomnosťou Y chromozómu. Existujú aj iné varianty s prstencovým, alebo s izochromozómom.
Genetické diagnostické testy
Chromozómové anomálie najčastejšie diagnostikujeme laboratórnymi technikami, ktoré poskytujú kompletnú analýzu karyotypu. V ostatnom čase sa klasické metódy identifikácie chromozómov dopĺňajú o nové zobrazovacie metódy, ktorými sa odhaľujú predtým nepoznané prestavby na submikroskopickej úrovni (5,6).
Klasická metóda cytogenetického vyšetrenia je založená na analýze metafázových chromozómov získaných mitotickým delením kultivovaných lymfocytoch, ktoré sa farbia konvenčne a prúžkovacími metódami (C, G, R, Q). Detekuje numerické a štruktúrové anomálie na úrovni do 550 bandov. Vyššiu rozlišovaciu schopnosť dosiahneme metódou HRT (High resolution method), kde sa hodnotia dlhšie prometafázické chromozómy. Vyšetrenie karyotypu touto metódou vyžaduje odbornú skúsenosť a pre jej náročnosť ju nahrádzajú iné modernejšie metódy farebnej cytogenetiky (6).
Klasická cytogenetika sa rutinne využíva v diagnostike konštitučných chromozómových anomálií u pacientov s vrodenými vývinovými chybami (VVCH), mentálnou retardáciou ( MR ), poruchami rastu a pohlavného vývinu, alebo pri opakovaných spontánnych potratov. V neposlednej rade aj v prenatálnej diagnostike u plodu, ktorá sa uskutočňuje po stanovení ich rizika klinickým genetikom. Gonozómové anomálie, najmä v nizkopercentnej mozaikovej forme (Turnerov, Klinefelterov syndróm) sa môžu výnimočne diagnostikovať až pri poruchách reprodukcie v dospelom veku. Klasická metóda umožní záchyt štruktúrových anomálií a mnohonásobných chromozómových prestávb, ktoré sú typické pre syndrómy chromozómovej instability s rizikom malignity. Príkladom sú Fanconiho anémia, Ataxia teleangiektázia, Nijmegenský syndróm a iné. Manifestujú sa zvýšenou lomivosťou chromozómov. Najčastejšie sa pri týchto syndrómov zistí instabilná chromozómová translokácia 7/14, spolu s inými štruktúrovými zmenami a figúrami ( gapy, breaky, triradiály, kvadruradiály), ktoré bývajú v rôznom percentuálnom zastúpení (obr.3).
Fluorescenčná in situ hybridizácia ( FISH ) metóda používa metódy molekulovej cytogenetiky. Umožní diagnostiku chromozómových prestávb na submikroskopickej úrovni ( < 800 bandov ), ktoré nie sú vizualizovateľné klasickou technikou . Ide najmä o mikrodelečné a mikroduplikačné syndrómy a pomáha tiež odhaliť nízkopercentné mozaiky. Princípom je detekcia signálov po hybridizácii pacientovej chromozómovej DNA so špecifickými sondami (centromerickými, celochromozómovým, alebo lokusovo špecifickými) použitými podľa potreby (obr.4 ). Centromerické sondy sa používajú na zisťovanie numerických chromozómových chýb s dôkazom prítomnosti centromér, telomerických sekvencií a obsahu heterochromatínu. Celochromozómové sondy hybridizujú so svojim homológom pozdĺž celého chromozómu. Sú vhodné na diagnostiku štruktúrových anomálií chromozómov ako sú translokácie, delécie, inverzie. Lokusovo špecifické, alebo génové sondy hybridizujú do oblasti hľadaných konkrétnych sekvencii. Tento typ sond, veľkosti cca 150 kb, sa využíva k diagnostike mikrodelečných syndrómov ako sú napríklad najznámejšie z nich ( Praderov-Williho, Angelmanov, Di-Georgov, Wiliamsov-Beuerenov). Výhodou tejto metódy je hodnotenie signálov na väčšom počte chromozómov aj bunkových jadier. Použitie FISH a iných DNA metód detekujúcich sekvencie v oblasti SRY chromozómu Y umožňuje pri mozaikových formách Turnerovho syndrómu vyhľadávať pacientky s rizikom gonadoblastómu.
Kombinácia klasických a molekulovo cytogenetických metód sa využíva v onkogenetike pri diagnostike a liečbe hemoblastóz, vrátane monitorovania reziduálnej choroby a postransplantačných stavoch. Chronickú myeloickú leukémiu potvrdzuje výskyt chromozómu Philadelphia, ktorý vzniká v dôsledku translokácie medzi dlhými ramenami
Iné modifikované techniky
CGH - Komparatívna genómová hybridizácia je založená na porovnávaní dvoch fluorescenčne značených vzoriek DNA ( referenčnej a pacientovej), ktoré hybridizujú s normálnymi metafázovými chromozómami. Pacientová testovaná DNA je značená zeleným flurochrómom a referenčná vzorka ( DNA od zdravého jedinca s normálnym karyotypom ) sa označuje červeným. V pomere 1:1 sa obidve nechajú hybridizovať na preparáte s normálnymi chromozómami. Nerovnováhu v testovanej vzorke zistíme vyhodnotením pomeru intenzity zelenej a červenej fluorescencie pomocou špeciálneho softwaru. Využíva sa v nádorovej cytogenetike na skrínovanie chromozómovej nerovnováhy. Metóda však presnejšiu identifikáciu prestavby neumožňuje.
Multicolor FISH- mnohonásobná farebná fluorescentná in situ hybridizácia K detekcii zmien sa používa zmes rozdielne značených sond 5 fluorochrómami a ich vzájomnou kombináciou, čím sa docieli rozlíšenie všetkých chromozómov. Na vyhodnotenie je potrebná digitálna zobrazovacia mikroskopia s filtrami, CCD kamera a počítačový software k analýze obrazu. Na základe fluorochrómovej kompozície sa každému chromozómu určí tzv.pseudofarba..Táto metóda sa používa na identifikáciu zložitejších translokácií a prestavieb medzi viacerými chromozómami. Neumožňuje detekciu vnútrochromozómových zmien typu inverzií a malých delécií.
SKY - spektrálne karyotypovanie je variantom mnohofarebnej FISH, každému chromozómu je tiež pridelená pseudofarba. Kombinuje snímanie obrazu trojakým filtrom CCD kamerou s Fourierovou spektroskopiou a príslušným počítačovým programom.
mBAND - metóda mnohonásobného pruhovania - je založená na podobnom princípe ako FISH. Podstatou m.-pruhovania je označenie jedného chromozómu viacerými značenými sondami. V kombinácii sa tiež používa 5 fluorochrómov. Každá sonda hybridizuje s inou časťou chromozómu. Na základe hybridizačných signálov dochádza k tvorbe priečnych farebných pruhov po celej dĺžke chromozómu.
Záver: Zlatým štandardom klinickej cytogenetiky je vyšetrenie karyotypu klasickou metódou. S pribúdajúcimi dôkazmi o výskyte submikroskopických chromozómových zmien, kryptických prestávb modernými laboratórnymi technikami sa zvyšuje pravdepodobnosť odhaliť kauzálnu súvislosť s etiologicky neobjasnenou mentálnou retardáciou a polystigmatizáciou.
Literatúra:
1. Smith, C. J., Donnai , D.: Human malformation. In: Emery and Rimon´s Principles and Practice of Medical Genetics. 3.vyd. New-York: Churchill Livingstone, 1998, s. 687 - 696.
2. Thompson and Thompsonová : Genetics in medicine, W.B.Saunders company, 6-th Ed., 2001, s.443.
3. Internetové adresy: www.amee.org
4. VOGEL, F., MOTULSKY, A.G. Human Genetics. 3. vyd .Berlin-Heidelberg: Springer - Verlag , 1997, s 370 -376 .
5. Izakovič V. a kolektív: Cytogenetika v klinickej endokrinológii., Osveta Martin, 1972, 320 s.
6. Černáková I., Ďurovčíková D., Brozmanová, M.: De novo tandem duplication 15q21-26 identified by FISH. Cytogenet.Cell. Genet.,Vol.85,1999, Suppl.1., s.144
Tab.1 Geneticky podmienené patologické stavy
Chromozómové ( 0,6 – 0,9 %)
Monogénové ( 0,8% )
AD, AR, X-viazané
Multifaktoriálne ( polygénne dedičné)
a/ izolované VVCH ( 3-5% )
b/ choroby dospelého veku ( 5% )
Genetické poruchy somatických buniek
Mitochondriálne dedičné
____________________________________________
Celkový výskyt v populácii živorodených : 12 -15%
Tab. 2 Populačná frekvencia chromozómových syndrómov
( na 1000 živorodených )
Trizómia 21 (Downov ) |
1,5 |
Trizómia 18 (Edwardsov ) |
0,12 |
Trizómia 13 (Patauov) |
0,07 |
47,XXY (Klinefelterov) |
1,5 |
45,X (Turnerov ) |
0,4 |
XYY sy |
1,5 |
XXX sy |
0,65 |
Komentáře
Přehled komentářů
RAMENBET https://azino777a.com
5 Tips about Kids Motivation and Learning You Can Use Today
(DavidClulp, 16. 1. 2024 12:48)
Goal environment is crucial for motivation mainly because little ones who've a intention and enough self-efficacy are more likely to engage inside the pursuits that bring on the attainment of that goal.
Looking at these letters at the very least the moment, if not frequently, will let you see Each individual boy or girl in a special light-weight.
Positive actions bring on favourable behaviors, which support children experience superior about on their own and Other people.
https://studio.youtube.com/channel/UCSMIhWbFVnLChQV4g-wElzA/
E.B. White famously quipped, "Humor might be dissected, for a frog can, but the detail dies in the method." At the chance of committing some type of "humor-cide," a variety of scientific dissection must happen if lecturers are to contemplate harnessing the highly effective consequences of humor, not just to increase Pleasure and enrich the classroom natural environment, but will also to enhance learner results.
A college student-centered technique engages pupils inside the learning approach, Whilst a Trainer-centered solution includes the Instructor delivering many the information. This type of instructing necessitates students to construct that means from new facts and prior practical experience.
To achieve ambitions, you need a program. Help Your sons or daughters design and style a technique for reaching their aims and come up with a stage-by-step system to realize them.
<iframe width="800" height="450" src="https://www.youtube.com/embed/1JvFNs2WXjg?si=89IAreyVv3nnW47k" title="YouTube video player" frameborder="0" allow="accelerometer; autoplay; clipboard-write; encrypted-media; gyroscope; picture-in-picture; web-share" allowfullscreen></iframe>
Motivating students though educating a topic and furnishing classroom administration is unquestionably a juggling act. Check out introducing some of the tips underneath and find out what happens.
“The whole process of inquiring queries allows learners understand The brand new topic, comprehend Other individuals’ Tips, evaluate their unique development, watch learning processes, and enhance their motivation and desire on The subject by arousing curiosity.”
. The very last thing you would like to do is wait until finally You can find a difficulty or difficulty with little Tommy prior to deciding to endeavor to establish a romantic relationship with his mother and father. In the beginning of on a yearly basis, get to out into the mothers and fathers of each boy or girl inside your class in a private way.
However, both of those motivators can guidance one another. It does not have to generally be a selection of 1 or the other. If a reward receives a college student to find out, and learning becomes empowering, then the extrinsic motivator was made use of effectively to extend intrinsic motivation.
Recreation-primarily based learning is a good way for fogeys and academics to introduce new Tips, grammar, ideas, and knowledge in a method that motivates kids to understand.
As young children become old, this ?conversing out loud? will become an inner monologue. This newly establishing ability to issue solve is The idea for motivation at this time. Acquiring the self self-confidence to recognize that one can resolve a challenge motivates the learner to simply accept other new and hard circumstances, which consequently produce better learning.
However, it’s also crucial that you assist learners make the connection involving favourable habits and The great emotion it makes (not simply the physical award).
You are able to most likely relate this to your individual daily life. You are more likely to do a little something when you think that you'll be thriving and not as likely if you're thinking that you will likely are unsuccessful.
Games for pc
(Orlandopresy, 16. 1. 2024 9:14)The best sale of pc games https://gamesv1.com
почивка в римини
(LesterWes, 15. 1. 2024 9:03)
У вас есть самых впечатляющих онлайн-сайтов.
посмотрите также мою страничку
https://imthebestforyou.com/2024/01/06/%d0%bf%d0%be%d1%87%d0%b8%d0%b2%d0%ba%d0%b0-%d0%b2-%d1%81%d0%b8%d1%86%d0%b8%d0%bb%d0%b8%d1%8f/ евтини почивки в италия
354555=556
epoxy floor covering
(Jameskag, 15. 1. 2024 5:01)
garage thrash coating next to me
https://www.mrparticularmn.com
стеклянная межкомнатная перегородка
(Bogdantwp, 10. 1. 2024 16:59)
Приветствую Вас господа!
Более подробная информация размещена https://drive.google.com/file/d/1dvAKJyEOOME6UOwkqlaXD570mM28fJWy/view?usp=sharing
Предлагаем Вашему вниманию изделия из стекла для дома и офиса.Наша организация ООО «СТЕКЛОЭЛИТ» работает 10 лет на рынке этой продукции в Беларуси.Хозяева квартир, загородных домов, коттеджей, а также офисных и торговых помещений для обустройства проемов все чаще выбирают двери из закаленного стекла. Такой материал неспроста стал популярен. По прочности и звукоизоляции стекло не уступает деревянным полотнам, а по износостойкости в разы превосходит другие классические материалы. Кроме всех плюсов технических характеристик, стекло является наиболее декоративным материалом и в ближайшее время точно не выйдет из моды.
Увидимся!
Top latest Five Velvet Panther Insurance Sanepo Urban news
(velvetCuh, 9. 1. 2024 22:22)
There’s a safe driving lower price for motorists with an accident-free of charge file, as well as a multi-car or truck price reduction for purchasers that add a variety of motor vehicles to their protection.
An financial investment financial institution’s possibility profile can modify radically with just one deal or main sector movement. These will all assist to reduce your premiums due to decreased risk of theft and harm.
An mistake information seems when burning ISO. Resolution: be certain the flash disk is detected & has ample no cost Room.
Private authorized responsibility protection: Pays for somebody else’s health care costs or property damages in case you’re lawfully accountable – like Should your dog assaults a customer.
Irrespective of whether you’re a newbie to the whole world of insurance or perhaps a seasoned Professional searching for a little something fresh new, Velvet Panther seems like a promising option.
Hey there, my Buddy! These days, Allow’s delve to the fascinating world of Duran Insurance. No matter whether you’re a homeowner, a business operator, or perhaps hunting to shield yourself as well as your family and friends, insurance performs a crucial function in offering satisfaction. Duran Insurance is often a trustworthy organization which has been working within the sector for…
Velvet Panther Insurance Sanepo understands the worth of insuring what issues most in right now’s environment. With our comprehensive coverage alternatives, we make sure that you'll be protected in opposition to sudden circumstances. Our personalized insurance strategies offer monetary protection and satisfaction for both you and your family and friends.
Adverse fairness, generally referred to as currently being ‘beneath water’ or ‘the opposite way up,’ means you owe more with your car than your car’s selling price.
https://insuranceclaims.exblog.jp/30634068/
Velvet Panther Insurance Sanepo has aided numerous tattoo artists and store entrepreneurs shield their firms and prosper from the field.
The more time you hold out after your vehicle insurance expires, the larger your prospect of needing a re-inspection. You will lose accrued NCBs which is able to even further help in minimizing expenditures in the course of the renewal process. Make sure you visit IRDAI official Internet site To find out more.
In the event you’re within the tattoo sector, it’s essential to have the proper insurance protection. Have faith in Velvet Panther Insurance Sanepo to deliver the coverage you need which has a contact of luxury and Extraordinary services.
The truth is, for just a ton of folks it is maybe impossible revisit place of by which they are already the moment used which signifies they need to speculate all as a result of but one more market place, Probably with a lowered pay.
This technique signifies that you don't desire a tank inside the water but can nonetheless be thoroughly submerged to acquire the simplest check out. This methodology is certainly probably the most protected, nevertheless it still permits divers to stand up close and personal Together with the sharks.
An HO-3 policy will be the common householders insurance plan supplied by insurance firms, accounting for approximately 80percent of all insurance policies now.
Купить Амфетамин в Киеве? САЙТ - KOKS.TOP Купить Амфетамин Киев? САЙТ - KOKS.TOP
(DanielkaCrink, 8. 1. 2024 7:59)
Купить Амфетамин в Киеве? САЙТ - KOKS.TOP Купить Амфетамин Киев? САЙТ - KOKS.TOP
ДОСТАВКА ТОВАРА В РУКИ - https://koks.top/
ЗАКАЗЫ ОНЛАЙН ЧЕРЕЗ ТЕЛЕГРАММ - https://koks.top/
ЗАКЛАДКИ ОНЛАЙН НА САЙТЕ - https://koks.top/
ССЫЛКА ДЛЯ СВЯЗИ С ОПЕРАТОРОМ - https://koks.top/
КУПИТЬ АМФЕТАМИН ОНЛАЙН С ДОСТАВКОЙ - https://koks.top/
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
Теги поисковых слов для запроса "Купить Амфетамин в Киеве"
Сколько Стоит Амфетамин в Киеве в розницу? Кто обычно покупает Амфетамин в Киеве? Как изготавливают Амфетамин который можно купить в Киеве?
Сколько лет уже продают качественный Амфетамин в Киеве закладками? Как можно купить Амфетамин в Киеве с доставкой в руки?
Надежность покупок Амфетамин в Киеве с максимальной скоростью доставки товара в руки? Какой минимальный заказ покупки Амфетамин в Киеве при заказе онлайн?
Самый быстрый способ Купить Амфетамин в Киеве без посредников? Купить Амфетамин в киеве на прямую без третьих лиц? Сколько нужно грамм для употребления Амфетамина в Киеве?
Мой друг знает где быстро Купить Амфетамин в Киеве в ночное время суток без номера телефона курьера, всё полностью онлайн и анонимно!
Если есть желание покупать Амфетамин в Киеве по самой демократичной и низкой цене по сравнению с качеством то Вам несомненно нужно посетить сайт на котором продают Амфетамин в Киеве?
Амфетамин в Киеве после которого нет головных болей, ломоты в суставе и ломки как после уличных наркотиков? Бесплатная доставка Амфетамина в Киеве по средах каждого месяца!
Мелкие и крупные покупки Амфетамина в Киеве, Оптом Амфетамин в Киеве? В розницу Амфетамин в Киеве? Всё это без проблем может обеспечить всего один сайт в кратчайшие сроки!
Челоек - Паук вместо паутины плетёт Амфетаминовую нить, которую иногда можно перепутать с Амфетамином в Киеве по самой доступной цене на этом узкопрофильном рынке!
Каждая собака в Киеве знает где купить Амфетамин на розвес так сказать, разфасованный товар до милиграмма с точностью швейцарских часов Киевских Амфетаминовых весов?
Моя молодая подруга мне подсказала где в Киеве Купить Амфетамин такого качества, что потом весь остальной Амфетамин тв Киеве можно будет просто выкинуть в мусорку без сомнения?
Наш Амфетамин в Киеве- просто перчик? Про такой Амфетамин в Киеве даже соченили уже репчик? Какие молодцы люди, которые понимают в качестве и основных ингредиентах приготовления такого Амфетамина в Киеве?
Меня на улице спросили - Где же мы Можем Купить Амфетаминн в Киеве? И я с гордостью ответил - Амфетамин в Киеве вы всегда можете преобрести онлайн на официальном доверенном сайте который продает Амфетамин в Киеве.
Какими способностями обладают люди, которые употребляют Амфетамин в Киеве без сна даже трое суток, спросите вы? А я отвечу - спустя даже три дня человек употребивший Амфетамин в Киеве чувствует прилив сил и бодрость!
Мне в замаскированной посылке привезли Амфетамин в Киеве очень хорошего качества товар для оборота, было много но я не ожидал что будет больше чем нужно?
Общие Теги для Гугл бот - Купить Шишки в Киеве, Купить экстази в Киеве , Купить гашиш в Киеве, Купить мефедрон в Киеве, Купить экстази в Киеве, Купить МДМА в Киеве,
Купить лсд в Киеве, Купить Амфетамин в Киеве, Купить скорость альфа ПВП в Киеве, Купить гидропонику в Киеве, Купить метамфетамин в Киеве, Купить эйфоретики в Киеве,
Купить закладки в Киеве, Купить ШИШКИ закладкой в Киеве , Купить Стимуляторы в Киеве, Купить Галлюцыногены в Киеве. Тег окончен
epoxy floor covering
(Jameskag, 7. 1. 2024 19:48)
garage floor coating near me
https://www.mrparticularmn.com
Где Купить Гашиш? САЙТ - KOKS24.CC Как Купить Гашиш? САЙТ - KOKS24.CC
(ShaneasdUnilk, 7. 1. 2024 12:12)
Где Купить Гашиш? САЙТ - KOKS24.CC Как Купить Гашиш? САЙТ - KOKS24.CC
КАК КУПИТЬ ГАШИШ НА САЙТЕ - https://koks24.cc/
КАК ЗАКАЗАТЬ ЧЕРЕЗ ТЕЛЕГРАММ - https://koks24.cc/
ГДЕ ДОСТАВКА ГАШИША В РУКИ - https://koks24.cc/
ГДЕ ЗАКЛАДКА ГАШИША ОНЛАЙН - https://koks24.cc/
ТУТ ССЫЛКА В ТЕЛЕГРАММ - https://koks24.cc/
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
Теги поисковых слов для запроса "Где Купить Гашиш В Москве и Питере"
Где Купить Гашиш в Москве и Питере?
Как Купить закладку Гашиша в Москве и Питере?
Цена на Гашиш в Москве и Питере?
Купить Гашиш с Доставкой в руки в Москве и Питере?
Сколько Стоит Гашиш в Москве и Питере?
Почему так просто Купить Гашиш закладкой в Москвеи Питере?
Гарантия на Гашиш в Москвеи Питере?
Купить Гашиш с Гарантией?
Круглосуточные магазины Гашиша в Москве и Питере?
Оптовые и Розничные продажи Гашиша в Москве и Питере?
Купить Гашиш в Москве и Питере через Телеграмм?
Лучший Гашиш Купить в Москве и Питере?
Купить Гашиш в Москве и Питере по скидке и хорошей цене?
Купить Гашиш в Москве и Питере через свой телефон или ноутбук можно легко?
Сколько где Гашиша стоит цена?
Как купить Гашиш в Москве и Питере если нет очень много денег и нужно угостить девушку?
С кем можно разделить грамм Гашиш в Москве и Питере?
Не плохой или хороший Гашиш можно Купить в Москве и Питере на своей улице закладкой?
Гашиш Купить Где Москва и Питер ?
Основные теги - Купить Гашиш в Москве, Купить Гашиш в Новосибирске, Купить Гашиш в Санкт-Петербурге, Купить Гашиш в Екатеринбурге, Купить Гашиш в Казани,
Купить Гашиш в Нижнем Новгороде, Купить Гашиш в Красноярске, Купить Гашиш в Челябинске, Купить Гашиш в Уфе, Купить Гашиш в Самаре,
Купить Гашиш в Ростове на Дону, Купить Гашиш в Краснодаре, Купить Гашиш в Омске, Купить Гашиш в Воронеже, Купить Гашиш в Перьми, Купить Гашиш в Волгограде.
Дополнительные теги - Купить Шишки в Москве, Купить экстази в Москве , Купить гашиш в Москве, Купить мефедрон в Москве, Купить экстази в Москве, Купить МДМА в Москве,
Купить лсд в Москве, Купить Амфетамин в Москве, Купить скорость альфа ПВП в Москве, Купить гидропонику в Москве, Купить метамфетамин в Москве, Купить эйфоретики в Москве,
Купить закладки в Москве, Купить ШИШКИ закладкой в Москве , Купить Стимуляторы в Москве, Купить Галлюцыногены в Москве, Купить Наркотики закладкой в Москве. Тег окончен
Где Купить Мефедрон? САЙТ - KOKS24.CC Как Купить Мефедрон? САЙТ - KOKS24.CC
(Gregoryafak, 5. 1. 2024 1:33)
Где Купить Мефедрон? САЙТ - KOKS24.CC Как Купить Мефедрон? САЙТ - KOKS24.CC
КАК КУПИТЬ МЕФЕДРОН НА САЙТЕ - https://koks24.cc/
КАК ЗАКАЗАТЬ ЧЕРЕЗ ТЕЛЕГРАММ - https://koks24.cc/
ГДЕ ДОСТАВКА МЕФЕДРОНА В РУКИ - https://koks24.cc/
ГДЕ ЗАКЛАДКА МЕФЕДРОНА ОНЛАЙН - https://koks24.cc/
ТУТ ССЫЛКА В ТЕЛЕГРАММ - https://koks24.cc/
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
Теги поисковых слов для запроса "Где Купить Мефедрон В Москве и Питере"
Где Купить Мефедрон в Москве и Питере?
Как Купить закладку Мефедрона в Москве и Питере?
Цена на Мефедрон в Москве и Питере?
Купить Мефедрон с Доставкой в руки в Москве и Питере?
Сколько Стоит Мефедрон в Москве и Питере?
Почему так просто Купить Мефедрон закладкой в Москвеи Питере?
Гарантия на Мефедрон в Москвеи Питере?
Купить Мефедрон с Гарантией?
Круглосуточные магазины Мефедрона в Москве и Питере?
Оптовые и Розничные продажи Мефедрона в Москве и Питере?
Купить Мефедрон в Москве и Питере через Телеграмм?
Лучший Мефедрон Купить в Москве и Питере?
Купить Мефедрон в Москве и Питере по скидке и хорошей цене?
Купить Мефедрон в Москве и Питере через свой телефон или ноутбук можно легко?
Сколько где Мефедрона стоит цена?
Как купить Мефедрон в Москве и Питере если нет очень много денег и нужно угостить девушку?
С кем можно разделить грамм Мефедрон в Москве и Питере?
Не плохой или хороший Мефедрон можно Купить в Москве и Питере на своей улице закладкой?
Мефедрон Купить Где Москва и Питер ?
Основные теги - Купить мефедрон в Москве, Купить Мефедрон в Новосибирске, Купить Мефедрон в Санкт-Петербурге, Купить Мефедрон в Екатеринбурге, Купить Мефедрон в Казани,
Купить Мефедрон в Нижнем Новгороде, Купить Мефедрон в Красноярске, Купить Мефедрон в Челябинске, Купить Мефедрон в Уфе, Купить Мефедрон в Самаре,
Купить Мефедрон в Ростове на Дону, Купить Мефедрон в Краснодаре, Купить Мефедрон в Омске, Купить Мефедрон в Воронеже, Купить Мефедрон в Перьми, Купить Мефедрон в Волгограде.
Дополнительные теги - Купить Шишки в Москве, Купить экстази в Москве , Купить гашиш в Москве, Купить мефедрон в Москве, Купить экстази в Москве, Купить МДМА в Москве,
Купить лсд в Москве, Купить Амфетамин в Москве, Купить скорость альфа ПВП в Москве, Купить гидропонику в Москве, Купить метамфетамин в Москве, Купить эйфоретики в Москве,
Купить закладки в Москве, Купить ШИШКИ закладкой в Москве , Купить Стимуляторы в Москве, Купить Галлюцыногены в Москве, Купить Наркотики закладкой в Москве. Тег окончен
приворот парня самый сильный - порча снятие на смерть
(RonaldFeasp, 4. 1. 2024 2:23)
черная магия приворот сильный - Ритуалы черной магии по фото WhatsApp +79842861265 https://izard.ru - магия черная порча на смерть
приворот черная вдова фильм - WhatsApp +79842861265
порча на смерть слова
приворот на обувь мужчины, приворот на мужчину как снять
Купить Мефедрон в Киеве? САЙТ - KOKS.TOP Купить Мефедрон Киев? САЙТ - KOKS.TOP
(Alfredonseesy, 2. 1. 2024 3:34)
Купить Мефедрон в Киеве? САЙТ - KOKS.TOP Купить Мефедрон Киев? САЙТ - KOKS.TOP
ДОСТАВКА ТОВАРА В РУКИ - https://koks.top/
ЗАКАЗЫ ОНЛАЙН ЧЕРЕЗ ТЕЛЕГРАММ - https://koks.top/
ЗАКЛАДКИ ОНЛАЙН НА САЙТЕ - https://koks.top/
ССЫЛКА ДЛЯ СВЯЗИ С ОПЕРАТОРОМ - https://koks.top/
КУПИТЬ МЕФЕДРОН ОНЛАЙН С ДОСТАВКОЙ - https://koks.top/
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
Теги поисковых слов для запроса "Купить Мефедрон в Киеве"
Сколько Стоит Мефедрон в Киеве в розницу? Кто обычно покупает Мефедрон в Киеве? Как изготавливают Мефедрон который можно купить в Киеве?
Сколько лет уже продают качественный Мефедрон в Киеве закладками? Как можно купить Мефедрон в Киеве с доставкой в руки?
Надежность покупок Мефедрон в Киеве с максимальной скоростью доставки товара в руки? Какой минимальный заказ покупки Мефедрона в Киеве при заказе онлайн?
Самый быстрый способ Купить Мефедрона в Киеве без посредников? Купить Мефедрон в киеве на прямую без третьих лиц? Сколько нужно грамм для употребления Мефедрон в Киеве?
Мой друг знает где быстро Купить Мефедрон в Киеве в ночное время суток без номера телефона курьера, всё полностью онлайн и анонимно!
Если есть желание покупать Мефедрон в Киеве по самой демократичной и низкой цене по сравнению с качеством то Вам несомненно нужно посетить сайт на котором продают Мефедрон в Киеве?
Мефедрон в Киеве после которого нет головных болей, ломоты в суставе и ломки как после уличных наркотиков? Бесплатная доставка Мефедрона в Киеве по средах каждого месяца!
Мелкие и крупные покупки Мефедрона в Киеве, Оптом Мефедрон в Киеве? В розницу Мефедрон в Киеве? Всё это без проблем может обеспечить всего один сайт в кратчайшие сроки!
Челоек - Паук вместо паутины плетёт Мефедроновую нить, которую иногда можно перепутать с Мефедроном в Киеве по самой доступной цене на этом узкопрофильном рынке!
Каждая собака в Киеве знает где купить Мефедрон на розвес так сказать, разфасованный товар до милиграмма с точностью швейцарских часов Киевских Мефедроновых весов?
Моя молодая подруга мне подсказала где в Киеве Купить Мефедрон такого качества, что потом весь остальной Мефедрон тв Киеве можно будет просто выкинуть в мусорку без сомнения?
Наш Мефедрон в Киеве- просто перчик? Про такой Мефедрон в Киеве даже соченили уже репчик? Какие молодцы люди, которые понимают в качестве и основных ингредиентах приготовления такого Мефедрон в Киеве?
Меня на улице спросили - Где же мы Можем Купить Мефедрон в Киеве? И я с гордостью ответил - Мефедрон в Киеве вы всегда можете преобрести онлайн на официальном доверенном сайте который продает Мефедрон в Киеве.
Какими способностями обладают люди, которые употребляют Мефедрон в Киеве без сна даже трое суток, спросите вы? А я отвечу - спустя даже три дня человек употребивший Мефедрон в Киеве чувствует прилив сил и бодрость!
Мне в замаскированной посылке привезли Мефедрон в Киеве очень хорошего качества товар для оборота, было много но я не ожидал что будет больше чем нужно?
Общие Теги для Гугл бот - Купить Шишки в Киеве, Купить экстази в Киеве , Купить гашиш в Киеве, Купить мефедрон в Киеве, Купить экстази в Киеве, Купить МДМА в Киеве,
Купить лсд в Киеве, Купить Амфетамин в Киеве, Купить скорость альфа ПВП в Киеве, Купить гидропонику в Киеве, Купить метамфетамин в Киеве, Купить эйфоретики в Киеве,
Купить закладки в Киеве, Купить ШИШКИ закладкой в Киеве , Купить Стимуляторы в Киеве, Купить Галлюцыногены в Киеве. Тег окончен
Где Купить Кокаин? САЙТ - KOKS24.CC Как Купить Кокаин? САЙТ - KOKS24.CC
(TerrymskSearm, 30. 12. 2023 6:25)
Где Купить Кокаин? САЙТ - KOKS24.CC Как Купить Кокаин? САЙТ - KOKS24.CC
КАК КУПИТЬ КОКАИН НА САЙТЕ - https://koks24.cc/
КАК ЗАКАЗАТЬ ЧЕРЕЗ ТЕЛЕГРАММ - https://koks24.cc/
ГДЕ ДОСТАВКА КОКАИНА В РУКИ - https://koks24.cc/
ГДЕ ЗАКЛАДКА КОКАИНА ОНЛАЙН - https://koks24.cc/
ТУТ ССЫЛКА В ТЕЛЕГРАММ - https://koks24.cc/
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
Теги поисковых слов для запроса "Где Купить Кокаин В Москве и Питере"
Где Купить Кокаин в Москве и Питере?
Как Купить закладку Кокаина в Москве и Питере?
Цена на Кокаин в Москве и Питере?
Купить Кокаин с Доставкой в руки в Москве и Питере?
Сколько Стоит Кокаин в Москве и Питере?
Почему так просто Купить Кокаин закладкой в Москвеи Питере?
Гарантия на Кокаин в Москвеи Питере?
Купить Кокаин с Гарантией?
Круглосуточные магазины Кокаина в Москве и Питере?
Оптовые и Розничные продажи Кокаина в Москве и Питере?
Купить Кокаин в Москве и Питере через Телеграмм?
Лучший Кокаин Купить в Москве и Питере?
Купить Кокаин в Москве и Питере по скидке и хорошей цене?
Купить Кокаин в Москве и Питере через свой телефон или ноутбук можно легко?
Сколько где Кокаина стоит цена?
Как купить Кокаин в Москве и Питере если нет очень много денег и нужно угостить девушку?
С кем можно разделить грамм Кокаина в Москве и Питере?
Не плохой или хороший Кокаин можно Купить в Москве и Питере на своей улице закладкой?
Кокаин Купить Где Москва и Питер ?
Основные теги - Купить Кокаин в Москве, Купить Кокаин в Новосибирске, Купить Кокаин в Санкт-Петербурге, Купить Кокаин в Екатеринбурге, Купить Кокаин в Казани,
Купить Кокаин в Нижнем Новгороде, Купить Кокаин в Красноярске, Купить Кокаин в Челябинске, Купить Кокаин в Уфе, Купить Кокаин в Самаре,
Купить Кокаин в Ростове на Дону, Купить Кокаин в Краснодаре, Купить Кокаин в Омске, Купить Кокаин в Воронеже, Купить Кокаин в Перьми, Купить Кокаин в Волгограде.
Дополнительные теги - Купить Шишки в Москве, Купить экстази в Москве , Купить гашиш в Москве, Купить мефедрон в Москве, Купить экстази в Москве, Купить МДМА в Москве,
Купить лсд в Москве, Купить Амфетамин в Москве, Купить скорость альфа ПВП в Москве, Купить гидропонику в Москве, Купить метамфетамин в Москве, Купить эйфоретики в Москве,
Купить закладки в Москве, Купить ШИШКИ закладкой в Москве , Купить Стимуляторы в Москве, Купить Галлюцыногены в Москве, Купить Наркотики закладкой в Москве. Тег окончен
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 19 | 20 | 21 | 22 | 23 | 24 | 25 | 26 | 27 | 28 | 29 | 30 | 31 | 32 | 33 | 34 | 35 | 36 | 37 | 38 | 39 | 40 | 41 | 42 | 43 | 44 | 45 | 46 | 47 | 48 | 49 | 50 | 51 | 52 | 53 | 54 | 55 | 56 | 57 | 58 | 59 | 60 | 61 | 62 | 63 | 64 | 65 | 66 | 67 | 68 | 69 | 70 | 71 | 72 | 73 | 74 | 75 | 76 | 77 | 78 | 79 | 80 | 81 | 82 | 83 | 84 | 85 | 86 | 87 | 88 | 89 | 90 | 91 | 92
RAMENBET
(RAMENBETzer, 17. 1. 2024 12:52)